乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件

笫23卷第3期大连轻工业学院学报vol, 23, No. 32004年9月Journal of Dalian Institute of Light IndustrySept. 200 4文章编号:1005-4014(2004)03019004乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件张羽飞,于春丽,张春枝(大连轻工业学院生物与食品工程学院,辽宁大连116034)关键词:黄芩;黄酮;提取摘要:考察了水煎煮法、乙醇回流法、乙醇室温浸提法对黄芩总黄酮得率和纯度的影响。确定乙醇室温浸提法的工艺条件为:50%乙醇室温浸提3次,每次24h;酸沉温度40℃;酸沉pH为0.5。该工艺稳定性好,黄芩总黄酮的平均得率为7.68%。中图分类号:R931.6文献标识码:AExtraction of flavones from Scutellaria baicalensis georgiwith ethanol under room temperatureZHANG Yu-fei, YU Chun-li, ZHANG Chun-zhi(School of Biological Foodstuff Engineering, Dalian Institute of Light Industry, Dalian 116034, China)Key words: Scutellaria baicalensis Georgi; flavones; extractionAbstract: The extraction of total flavones from Scutellaria baicalensis georgi by three different methodsstudied. The optimal extracting conditions are as follows: the powder of Scutellaria baicalensis Georgisteeped 3 times with 10 folds 50% of the ethanol for 24 h, precipitation of flavones is at pH 0.5 and 40CCompared with original process, the method is stable, the average yield of flavones is 7. 68%黄芩为唇形科植物黄芩( scutellaria正品黄芩 Scutellaria baicalensis georgi。uiculensis georgi)的干燥根,具有清热燥湿,泻火1.1.2试剂解毒,止血,安胎等功效1,是一种常用的传统中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素标准品购于Wako药。黄芩总黄酮是黄芩主要有效成分。为适应中 Pure Chemical Industries,Ltd.(日本),薄层层析标准化、现代化的要求,釆用黄芩总黄酮替代黄板 silica gel60F2s4购于德国 Merck公司。乙醇芩饮片已成为发展趋势。盐酸、甲醇等均为分析纯黄芩总黄酮的提取可采用水煎煮法2,3)、乙1.1.3仪器醇提取法4)、加助溶剂提取法5)、超声波法6、超RE52A型旋转蒸发器,数控超级恒温槽,滤法微波提取法、高速逆流色谱法、亚临界752型紫外可见分光光度计,NB型精密扭力天水提取法0等多种方法。但真正用于规模化平。生产的工艺主要有水煎煮法和乙醇提取法。作者1.2方法对水煎煮法、乙醇回流提取法和乙醇室温浸提法1.2.1黄芩总黄酮含量的测定进行了比较,并确定乙醇室温浸提法的工艺条件,采用紫外分光光度法1l。被测样品用70%检验了工艺的稳定性。乙醇溶解后作适当稀释,测定279nm处吸光值材料与方法利用标准曲线计算黄芩总黄酮的含量。以黄芩苷作标准,70%乙醇作空白。材料1.2.2黄芩总黄酮成分的测定采用薄层层析法。以甲醇为溶剂配制黄芩饮片,购自大连市药材公司。经鉴定为1mg中国煤化工的黄芩总黄收稿日期:200408-23CNMHG作者简介;张羽飞(1980~),女,硕士研究生第3期张羽飞等:乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件酮样品溶液,将上述对照品及样品各1L依次点样于薄层层析板( silica gel60F2s)上,于层析缸中1.0}y=0.0538x+0096展开,展开剂为V(乙酸乙酯):V(丁酮):v(甲=0.9993酸):V(水)=10:7:1:1,取出吹干,紫外显色。1.2.3水煎煮法提取黄芩总黄酮150g黄芩粗粉,水煎煮3次,水量是中药量的10倍,时间均为1b,保持微沸状态。脱脂棉过滤,合并滤液,浓缩至中药量的10倍。用6mol浓盐酸调浓缩液pH值为3.5,静置60min,过滤p(黄芩苷)/(gmL)所得滤液升温至40℃,调pH值1.5,保温60min,室温静置24h,抽滤,沉淀用去离子水洗图1紫外分光光度法测定黄芩苷含量至中性,再用少量95%乙醇洗涤,干燥器内干燥的标准曲线至恒重。1.2.4乙醇回流法提取黄芩总黄酮媒不同。由于黄芩总黄酮中的主要成分黄芩苷是150g黄芩粗粉,用10倍体积60%乙醇回流连有葡萄糖醛酸结构的黄酮衍生物,具有一定提取3次,各1h,滤液减压回收尽乙醇后,用水定的脂溶性。因此,用乙醇作溶媒时溶出率更高。容至中药量的10倍。余下操作过程同1.2.3。表1不同提取方法对黄芩总黄酮得率和纯1.2.5乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮度的影响150g黄芩粗粉,用10倍体积60%乙醇室温浸提24h,提取3次,滤液减压回收尽乙醇后,用提取方法产品得率/%黄芩总黄酮黄芩总黄酮纯度/%导率/%水定容至中药量的10倍。余下操作过程同水煎煮法72.81乙醇回流法乙醇室温浸提法85,471.2.6乙醇室温浸提法工艺条件的选择150g黄芩粗粉,醇浸后,将滤液蒸于制备浸乙醇室温浸提法与乙醇回流法相比产品得率膏,对乙醇浓度、醇浸时间、料液比、醇浸次数进行有大幅度提高,这是因为前者延长了提取时间,提选择。在此基础上,再确定酸沉温度、pH的控制高了黄芩总黄酮的溶出率。此外,乙醇室温浸提条件法比回流法更适合工业化生产。1.2.7乙醇室温浸提法工艺稳定性实验2.3乙醇室温浸提法工艺条件的选择按照所选定的工艺条件进行3次黄芩总黄酮2.3.1乙醇浓度对黄芩总黄酮得率的影响的提取实验,检测工艺的稳定性用不同浓度的乙醇对黄芩粗粉进行室温浸提。紫外分光光度法测定黄芩总黄酮含量,计算2结果与讨论得率。结果见图2。2.1紫外分光光度法测定黄芩苷含量的标准曲线釆用1.2.1方法测得黄芩苷含量的标准曲线见图1。标准曲线直线方程为y=0.0538x+0.0096,其中y为279m吸光值,x为黄芩苷含量(g/mL)。2.2不同提取方法对黄芩总黄酮得率和纯度的影响釆用水煎煮法、乙醇回流法和乙醇室温浸提06070法提取黄芩总黄酮,结果见表1。表1结果显示中国煤化工黄芩总黄酮得率从高到底依次为乙醇室温浸提CNMHG总黄酮得率法、乙醇回流法、水煎煮法。其中乙醇回流法和水的影响煎煮法均利用溶剂加热提取,且时间相同,只是溶大连轻工业学院学报第23卷图2结果显示,50%乙醇提取黄芩总黄酮得芩总黄酮4次,结果见表2。率最大,为13.22%2.3.2醇浸时间对黄芩总黄酮得率的影响表2醇浸次数对黄芩总黄酮溶出率的彩响采用50%乙醇作溶媒进行提取,制备浸膏醇浸次数黄芩总黄酮溶出率/%测定各个提取时间下的黄芩总黄酮含量,计算得123477.8率。结果见图3。表2结果显示,2次提取可溶出77.8%的黄芩总黄酮,3次提取黄芩总黄酮的溶出率可达94.5%E9.52.3.5酸沉淀温度对黄芩总黄酮得率的影响举采用酸沉淀的方法提取黄芩总黄酮,各文献中采用的酸沉温度不同。一般在40~80℃不等。测定不同温度下酸沉淀所得黄芩总黄酮,结果见图5。图3提取时间对黄芩总黄酮得率的影响图3结果显示,黄芩总黄酮在24h溶出率最大,为10.59%2.3.3料液比对黄芩总黄酮得率的影响料液比是黄芩饮片粗粉的质量(g)与溶媒乙醇体积(mL)的数值之比。采用不同体积50%乙,刚醇室温浸提24h,测定黄芩总黄酮含量,计算得率。结果见图4图5酸沉温度对黄芩总黄酮得率的影响14在不同温度下进行酸沉淀,温度越低,酸沉越慢;温度越高酸沉速度越快,但沉淀物中混有大颗10粒杂质,80℃酸沉所得沉淀物表面有油状物质。由图5可知,酸沉温度为40℃时黄芩总黄酮得率劉§§氵最高,为3.68%。2.3.6酸沉淀pH值对黄芩总黄酮得率的影响1:0.61:0.81:10101:141:16料液比黄芩苷分子结构中C2上羟基易成盐,而在酸性条件下黄芩苷分子就被还原出来12。酸沉时图4料液比对黄芩总黄酮得率的影响的pH值对此反应有显著影响,测定不同pH条件图4结果显示,乙醇用量少时,黄芩总黄酮浸下沉淀得到的黄芩总黄酮,结果见图6。图6结出不完全,当料液比为1:10时,黄芩总黄酮得率果显示,在pH05时沉淀黄芩总黄酮得率最大,达到最大,为17.39%。为5.69%。2.3.4醇浸次数对黄芩总黄酮得率的影响2.4乙醇室温浸提法提取的黄芩总黄酮成分组成为保证中药有效成分的充分溶出,通常采用采用薄层层析法(TLC)测定乙醇室温浸提法多次提取法。但多次提取溶媒消耗量大,浓缩耗得到中国煤化工图7可见,黄次数十分必要。采用10倍量的50%乙醇提取黄品,另姒CNMH(于缺少标准能多,致使生产成本增高。因此,确定适宜的提取芩总直H鋸文献[13]报第3期张羽飞等:乙醇室温浸提法提取黄芩总黄酮的工艺条件道,应该是汉黄芩苷。3结论(1)3种黄芩总黄酮提取方法中,乙醇室温5浸提法明显优于水煎煮法和乙醇回流法(2)乙醇室温浸提法工艺条件为:乙醇浓度*检50%;室温浸提3次;料液比为1:10;提取时间24h;酸沉淀温度40℃;pH值0.5。4.8(3)乙醇室温浸提法工艺条件和产品质量稳定,黄芩总黄酮中主要成分为黄芩苷。1.5参考文献:图6酸沉pH值对黄芩总黄酮得率的影响[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:第1部[M]北京:化学工业出版社,2000.2482]周德庆,曾骆.黄芩总黄酮的提取工艺研究[J].华西药学杂志,2002,18(1):79-80[3]韩鲁佳,阎巧娟,江正强,等.黄芩甙提取分离方法及工艺研究[J].农业工程学报,2000,16(6):118-122[4]黎万寿,陈幸.黄芩苷提取工艺研究[J].中草药[5]黄维安,蒙毅.黄芩甙提取、精制及含量测定的研究概况[J].中草药,1996,27(增刊):240-242[6]郭孝武.超声提取黄芩苷成分的实验研究[J].中国1234现代应用药学杂志,1999,16(3):18[7]李彤彤,李宏,候茂君,等.黄芩化学成分及黄芩苷1一汉黄芩素,2一黄芩总黄酮,3一黄芩素,4一黄芩苷提取方法研究进展[J].天津药学,2002,14(3):7-8图7黄芩总黄酮的TLC图谱[8] LU HT, JIANG Y, CHEN F. Application of high-2.5乙醇室温浸提法的稳定性peed counter-current chromatography to the preparative separation and purification of baicalin from the Chi由2.3的实验结果,得到乙醇室温浸提法的nese medicinal plant Scutellaria baicalensis [J].Chro-提取工艺,按照此工艺提取黄芩总黄酮,3批实验matogr A,2003,1017(1-2):117-123结果见表3。[9]徐志宏,钱广生,刘三康,等,黄芩中黄芩苷的亚临界水提取及高效液相色谱分析[].色谱,2004,22(1)表3乙醇室温浸提法的稳定性批次黄芩总黄酮得率/%偏差/%[10] IBANEZ E, KUBATOVA A, SENORANS F], et al0.52Subcritical water extraction of antioxicfrom rosemary plants[ J]. Agric Food Chem, 2003, 51(2):375-382[11]唐小明.紫外分光光度法测定清开灵注射液中黄芩稳定性是评价中药提取工艺的重要指标,也苷的含量[J].海峡药学,2001,13(1):33-34是实现中药提取工艺标准化的必要条件。由表[12]郝秉军,改进酸沉工艺,提高黄芩总甙收率[].中数据可知,选定的乙醇室温浸提法工艺比较稳定,成药,1994,16(2):7-8黄芩总黄酮得率有所提髙。[13]肖培根,新编中药志:第1卷[M].北京:化学工业出版社,2000.865中国煤化工CNMHG