聚乙二醇6 000对Tween-80含量测定的影响

中国生物制品学杂志2000年第13卷第!期 Chin I Biological20,ol.3No.聚乙二醇6000对 Tween-80含量测定的影响沈琦刘大英(中国药品生物制品检定所,北京100050【摘要】目的了解聚乙二醇6000对测定Twen80含量的影响。方法将被检样品加95%乙醇沉淀蛋后,上清加二氯甲烷再加铵钴硫氰酸盐溶液用紫外分光光度计测A吸收峰。结果PC6000含量>500pgm时,干扰 Tween80含量测定。结论一定浓度的PEG6000对测定Twn80含量有干扰【关键词】聚乙二醇600(PEC600)吐温80(Twen-80)凝血酶原复合物(PC)PFC6000为无毒的水溶性合成聚合体。是3.不含Twen80的不同浓度PEG6000对检种性质温和的蛋白沉淀剂,已被广泛地用于人血浆测结果的干扰的蛋白分离,特别是凝血因子类蛋白的分离。我国对不同浓度的PEC6000溶液按方法处理,在目前有数家单位采用PEC6000结合其他分离蛋白620m波长比色,5种浓度均能测出 Tween-80,但实的方法生产人凝血酶原复合物(PCC)。在生产工艺际不含Twee80。PEC6000浓度在500ml时影中采用SD病毒灭活方法。根据1995版的《中国生响更大,见表1。物制品规程》要求,在PCC的成品中应检测Twen4.不同浓度的PEG6000对检测结果的影响80和PEC6000残留量。笔者在研究用显色法测定在已知Twn-80含量的标准液和含 Tween80rwcn80残留量2时,发现一定浓度的PC6000对的PCC样品中加不同浓度的PEC600,计算回收Twen80含量的测定有影响。率,结果表明PEG6004004g/ml时不影响Twen材料与方法80的含量检测,见表2、表3。1.试剂0000A95%乙醇、氯化钠、二氯甲烷、硝酸钻、硫氰酸铵0080均为AR级国产试剂;PEC6000进口分装,用水配0.60成0.1%; Tween80进口分装,用水配成0.1%;凝血酶原复合物,由R血制品公司和H生物工程有限公0.020司提供。220.0300.0400.02.方法a:0,1%PEG6000样品加入95%乙醇沉淀蛋白,离心,上清液在7000am-0.004A0.10055℃水浴中吹去乙醇加入二氯甲烷,最后加入铵钴硫氰酸盐溶液。用紫外分光光度计测Aa的吸收0000220.0300.0400.01.试剂处理前的光谱扫描b: Dichloromethane700.0nm0.001A对0.1%PEC600、0.1%Twen-80和二氯甲烷3种溶液分别进行光谱扫描。在620nm处均无光吸牧峰,见图1(a、b、c2.3种溶液处理后的光谱扫描YHcNM煤化工对含 Tween-80的PC、100g/mlTw80标准0.U220.0300.0400.0500.0600,0700.0溶液和500 ug/ml PEG600溶液分别按方法进行处e: 0. 1%Iween-s0理、二氯甲烷萃取,最后进行全波长扫描。以上3种图1试剂的光谱扫描溶液在620m波长均有吸收峰,见图2(A、BC)。中国生物制品学杂志2000年第13卷第1期 hin J Biologicals20,vol.13.No,1700.00.032A表3不同浓度的PEG600对含Twen80POC样品检测0.1000.080的影响0.060Tween -80厂家批号回收率(%)0.040(ug/ml)970618 onegin2300300.04000500.0600.0700.0A: Tween-80(100ug/ml)7000nm0.057A045PCC样品中Twe80与PEG6000残留量的关系0.000230.0300.0400.0500.0600.0700.0按《中国生物制品规程》方法对18批PCC样B:PGE6000(5004g/m)品Twen-80和PEC6∞残留量检测结果进行追0.I700.00m0.028A踪。R公司生产的前6批PCC,PEG6000含量分布0.080在192~368g/ml范围,后6批PEC6000含量均<100g/m,Twe80含量均10gml,全部不合格。2300300.0400.0500.060后3批 PCC PEG6000含量<100ygml,Twen80含C:PCC(ugm,含we80)量全部合格,见表4。图2含Twea80的PCC样品、Twem80标准溶液和PEG6000溶液按方法处理后的光谱表4PC样品中Twem80与PEG6000残留量的关系家批号PEC6000pyml) Tween-80(pgm)表1不同浓度PFCG6000对检测结果的干扰R9410l6PEG-6 000(/ml)Tween-80(ug/ml)94l018214970330表2不同浓度的PEC600对Twem-8标准液检测的影响970824Fwxm-80标准液浓度 PEG-6m Tween80回收率42.6(eym)浓度(rm)(%98092452.921247.360.312140060.3中国煤化工20067.790.3CNMH117.39810015159.398l001611830.2130中国生物制品学杂志200年第13卷第1期 Chin j biradicals200,vol13No1生产工艺中去除Twen-80,才能使最终产品 Tween80含量不超标我们的研究结果显示PEC6000含量>5004(对华物工力肌位同志和中美合资上海莱主血mnl于扰Twen-80含量测定。对近几年18批PCC中国煤化工持深致谢意!)PEC6000含量检测结果的追踪,PEG6000含量呈CNMHG明显的下降趋势,均<10)1gml,对Twen:0含量检1中作人民共和国卫生部中倒生物制品规程(-部),195测影响不大。H公司生产的前3批 PCC Tween-80含2沈琦,陈继亭,刘大英.三种凝血子制品中Twem8残留量测定量超标,PEG6000千扰的可能性不大,而是制品本方法的研究和建立中国生物制品学杂志,19,12(2):i8-121身 Tween-80含量高。所以要考虑改进生产工艺,在(19903-18收稿,19904-19修阿)