丹酚酸提取工艺研究

第24卷第6期广东药学院学报Vol 24 No 62008年12月JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACYDec.2008丹酚酸提取工艺研究贺帆,吴婵娟,髙崇凯(广东药学院药剂教研室,广东广州510006)摘要:目的优化丹酚酸的提取工艺,提高丹酚酸B的提取率。方法以喷雾干燥法获得的丹酚酸固体粉末的收率和丹酚酸B含量为指标,采用均匀设计法优化丹酚酸的乙醇浸提工艺,考察乙醇浓度、提取时间和提取温度对丹酚酸B提取率的影响。结果最佳提取工艺为:45%(体积分数)乙醇提取时间为1h,提取次数为2次提取温度为70℃。结论提取物中丹酚酸B纯度达到70%以上,优化工艺合理、可行关键词:丹酚酸B;提取工艺;均匀设计;大孔吸附树脂中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:100-8783(2008)06-055-03Optimization of the extraction procedure of Salvia acid from Salvia miltiorrhizaHE Fan, WU Chan-juan, GAO Chong-kaiSection of Pharmacy, Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou, Guangdong 510006, China)Abstract: Objective To Optimize the extraction process of Salvia acid from Salvia miltiorrhiza. Methods Salvia acid of the spray dryingpowder and salvia acid B were used as use the standard. Uniform design was used to optimize the extraction procedure. The effect ofethanol concentration, extraction time and temperature on the extraction efficiency of salvia acid B were optimized. Results The optimaconditions were as followings: 45% of ethanol, I h of extraction time and 2 cycles of extraction at 70 C. Conclusion The extractionyield could reach 70% under the optimal extraction procedure.Key words: salvia acid B; extraction process; uniform design; macroporous resin丹参水溶性有效成分多具有酚酸性结构,丹参标,进行丹酚酸提取工艺研究,以确定最佳的提取素(化学名为B3,4二羟苯乳酸,B-3,4-工艺探索适合工业化提取的工艺条件。dihydroxybenyl lacticacid)是各种丹酚酸的基本化学1仪器与试剂结构:丹酚酸A是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成;丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸11仪器缩合而成;丹酚酸C则为二分子丹参素缩合而成;FA1004N型电子分析天平(上海精密科学仪器其他丹酚酸亦有类似结构。丹参水溶性成分中的迷有限公司),Z8002天平(上海精密科学仪器有限公迭香酸( ros-marinic acid a,Ros)也是由一分子丹参司),RES298A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),素和一分子咖啡酸缩合而成。此外,还有四甲基丹LXJ-Ⅱ型离心沉淀机(上海医用分析仪器厂),YL酚酸( tetramethyl salvianolic acid A,SalM)等等。015型实验型喷雾干燥机(上海雅程仪器设备有限目前,工业上提取丹参有效成分主要以热回流公司),QT-330型柱温箱(QM,旗美),LC-10ATv型法为主,而酚酸类性质不稳定、易氧化水解因而提泵(日本岛津),SPD-10Av型紫外检测器(日本岛取工艺的研究应多指标综合考虑。选择不稳定成分津)高效液相色谱柱( Diamonsil钻石),电子天平作为提取工艺筛选的指标性成分,有利于筛选出合( SHIMADZU AYI20),KQ-100型超声波清洗器(昆理的工艺条件,防止成分在提取工艺中损失过山市超声仪器有限公司),pHs25型pH计(上海智大2-3)。本研究以提取物得率和丹酚酸B含量为指光仪器仪表有限公司)。12V山中国煤化工作者简介:贺帆(1983-)女项士研究生;通讯作者:高索丹C MH GLia miltiorrhiza凯男,教授研究方向为口服天然药物给药系统Bge.的干燥根和根茎(购自广州市天河宝润堂中药和国体物理药剂学研究,电话:0203935211,饮片厂),经广州中医药大学高英主任药师检验符Email:godck@tom.como555广东药学院学报,2008,24(6)合《中国药典》2005版一部丹参项下规定。乙醇(分22.2丹参提取液分离纯化离心后的样品溶液析纯,天津市富字精细化工有限公司),甲醇、乙腈通过D101大孔树脂(药材与树脂用量比为1:4;流(色谱纯,迪马科技有限公司),甲酸(分析纯,广州速为20~3.0BV/h),用水进行冲洗除去水溶性化学试剂厂),D101大孔吸附树脂(天津市光复精杂质。采用FeCl3检测法,判断洗脱液中有无丹酚细化工研究所),盐酸(分析纯,广州市白云区良田酸B成分被洗脱,用水6倍量冲洗,继用体积分数光明化工厂),FeCl3(分析纯,天津市大茂化学试剂30%的乙醇7倍量洗脱(流速为0.5~1.0Bv/h)厂),丹酚酸B对照品(批号:200504,中国药品生物收集体积分数为30%的乙醇洗脱液,用旋转蒸发仪制品检定所)。(60℃)减压浓缩,浓缩至液体相对密度为1.15方法浓缩液喷雾干燥(进风温度220℃,出风温度80℃),最终得淡黄色固体粉末。置干燥器内,备用。2.1丹酚酸提取工艺2.3丹酚酸B含量测定2.1.1实验设计采用均匀设计法选择影响醇提2.3.1供试品溶液的制备精密称取丹参提取物的3个主要因素:乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提粉末10mg,加入100mL量瓶中,加水溶解定容,播取温度(C)为考察指标,乙醇浓度选择9个水平,提匀,过0.45μm微孔滤膜即得取时间及提取温度各选择3水平、各水平循环3次,2.3.2色谱条件色谱柱:C1(250mm×4.6采用U(9)表安排试验,见表1。mm,5μm);流动相:甲醇水乙腈甲酸(体积比30表1因素水平表59:10:1);流速:1mL·min-;检测波长:286mTab 1 Factor-level table进样量:10μL;柱温35℃;因素233含量测定方法精密量取供试品溶液10水平甲(乙醇)/%(提取时间)/h联(提取温度)/ruL,注入液相色谱仪中,按“23.2”项下条件操作,测定丹酚酸B吸收峰的峰面积积分值,计算丹酚酸B含量。2.4样品的固形物含量将洗脱液于60℃恒温水浴挥干乙醇和部分水分成稠膏状,膏状物移至真空干燥箱(60℃,0.096780000000MPa)减压干燥,置干燥器0.5h(防回潮),待样品30冷却后精密称量3703结果21.2样品溶液的制备取丹参药材100g,加入丹酚酸提取工艺正交试验结果见表2。将实验3000mL的圆底烧瓶中按表1实验列号各条件操数据进行多元回归,求得回归方程Y=1961+作,于恒温水浴锅中加热浸提,趁热抽滤,滤渣再按20861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X2+原条件进行第2次乙醇浸提,趁热抽滤,合并2次滤0.0186X1X3,R2=0.9545,F=6.1501,方程显著有液。将提取液用旋转蒸发仪进行减压浓缩至乙醇除效,并得到最佳工艺参数为:乙醇浓度为45%,提取尽将浓缩液用配制好的质量分数10%的盐酸溶液次每次1h,温度为70℃。对最佳处方进行验调至pH=3,用离心机(2000r/min,5min)离心浓证,3批样品丹酚酸B含量分别为:70.23%缩液,用布氏漏斗抽滤作为样品溶液备用。69.04%、69.69%。22大孔吸附树脂分离纯化22.1树脂的预处理D01树脂用体积分数4讨论中国煤化工95%的乙醇浸泡24h,除去上层漂浮物,湿法装柱,4.1于酚酸B,大部分用乙醇流动清洗,应不时检查流出的乙醇液,至乙醇文献CNMHG醇浸提的方法提液与水混合(1:5)不呈白色浑浊为止,然后用水冲取,其目的是为了避免用水提取时提取液中含有糖洗至无醇味止类等水溶性杂质而使液体黏稠。556第6期贺帆,等.丹酚酸提取工艺研究豪2U,(9)均匀设计表及试验结果液中的游离状态酸性条件下丹参酚酸的极性下降Tab. 2 Uniform design of the extraction procedure有利于大孔吸附树脂对丹酚酸的吸附。因素含量固形物4.4以体积分数为95%的乙醇湿法装柱,清洗,然C%收率/%后用水冲洗,冲洗速度宜慢使大孔树脂堆实以利于3020.711.3456吸附药液;药液通过D101大孔树脂,流速控制为树25051114.6148脂体积20~30BVh,这样可以使药液与树脂充分37069.334.9325接触,静置一段时间再用水进行冲洗,洗脱糖等水溶13065.73.2823性杂质而丹酚酸B类成分未被洗脱。用体积分数为5065.184.227330%的乙醇洗脱丹酚酸B具有良好的解吸附性7058275.6672703012.570.7363参考文献[1]周长新,罗厚蔚丹羽正武.丹参水溶性化学成分的研究7019.381.1664[J].中国药科大学学报,199,30(6):411-416[2]孙金兰,韩伟.丹参中丹酚酸B的提取分离及分析方法4.2丹酚酸B对热不稳定,易氧化水解,对受热温研究进展[].中医药现代化,2007,9(1):49-53度和受热时间敏感,所以丹参提取液不宜长时间高[3]富志军浓缩精制及干燥对复方丹参提取液中水溶性温浓缩。试验结果表明,丹酚酸提取宜釆用减压浓成分的影响[刀]安徽中医学院学报,2003,22(2):52-缩和喷雾干燥等工艺,降低工艺过程的温度和受热时间,有利于提取物中丹酚酸保存率的提高[4]李宁,徐文进高祟凯HPLC测定丹酚酸渗透泵片丹酚4.3将浓缩液pH值调至3,可以使部分杂质析出,酸B的含量[J].广东药学院学报,2008,24(5):469且酸性体系有利于丹酚酸B水溶液在受热条件下471的稳定;同时调节溶液的pH可以改变丹酚酸在溶收稿日期:2008-08-10;修回日期:2008-10-06)医学上常用的有关“浓度”和“含量”的量与单位标准的量和单位非标准的量和单位量名称(符号)单位符号量名称(符号)单位符号1B的流度B的物质的量mL,mUm3体积克分子浓度摩尔浓度1(M),当量m,M,NL浓度2B的质量浓度(pB)kg/L重量体积百分浓度,百分浓度%(W/V,%)3B的质量分数(n)重量百分浓度重量百分数,百分含量g%,%(聊/W),ppm,pb4B的体积分数(q)体积百分浓度,体积百分数9, %(V/V), ppm, ppb5溶质B的质量摩尔浓度mo重量克分子浓度,重量摩尔浓度(m)6B的摩尔分数(x,)克分子百分浓度摩尔百分数%(M/M),%(NN)7质量比(《)质量比例浓度8体积比(ψ)体积比例浓度9溶质B的摩尔比(r)克分子比如:1.“试剂的终浓度为2mg/L”→“试剂的终质量浓度为2mg/L中国煤化工的浓度为5%”→“(CO2)=0.05或(5%)”或“CO2的体积CNMHG3.“H2SO4溶液浓度为1%”→“(H2SO4)=0.01或(1%)”或“H2SO4溶液的质量分数为1%4.“HNO3:Cl=1:3→“ψ(HNO3:HC)=1:3”或“保留比例式557