肉苁蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影响因素研究

江苏农业科学2009年第1期肉苁蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影响因素研究吴海虹!,玄国东2,刘春泉(1江苏省农业科学院农产品加工研究所江苏南京2100142山东省产品质敏监督检验研究院,山东济南250100)摘要:以松果菊苷为标准品,采用紫外分光光度法测定了盐生肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物的含量,同时对影响肉苁蓉苯乙醇苷乙醇回流提取的反应温度、乙醉体积分数料液比、提取时间以及提取次数等5个因素进行了分析确定了较佳工艺条件。结果表明肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物的较佳提取条件为温度70℃,料液比1:10,乙醇体积分数80%,提取时间2h,提取次数2次。关键词:肉苁蓉;苯乙醇苷;影响因素;提取工艺中图分类号:R84.1文献标志码:A文章编号:1002-1302(2001-0250-03肉苁蓉属多年生根寄生草本植物,是名贵中药材,具有补为40目,备用。肾、益精、润肠、抗衰老等功效,由于生长于沙漠环境,又有1.2.2松果菊苷测定波长的选择称取松果菊苷1.5mg,沙漠人参”之美誉。国内外学者对肉苁蓉的化学成分进行置于50m容量瓶中,用甲醇定容至刻度摇匀,在波长为230了大量研究迄今为止已经分离出约近70种化合物包括苯~450mm范围内进行紫外扫描。如图I所示,在波长为270乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类化合物以及生物碱和糖类等-400m范围内,松果菊苷均有紫外吸收,其中338m处紫其他成分。其中最主要成分为苯乙醇苷类化合物,以B-外吸收值最高因此在试验研究中选定该波长进行松果菊苷葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷,广泛存在于标准曲线的绘制双子叶植物中,是由苯乙基咖啡酰基和多个糖基组成的一类分子量较大、结构相似的水溶性物质2,根据其取代基的不同,可分为肉苁蓉苷(A、B、C、D)、类叶升麻苷、松果菊苷等。Sao等“药理学研究证明,类叶升麻苷、肉苁蓉苷A和C、松果菊苷等能显著提高小鼠的性功能,并能增强记忆力。本试验通过对盐生肉苁蓉苯乙醇苷乙醇流提取的影响因素进行分析找出了苯乙醇苷类化合物的较佳提取条件,为苯乙醇苷类化合物开发利用提供一定的科学依据。302632963293623954284501材料与方法波长(m1.1材料、试剂与仅器图1松粟菊苷光谱扫描图谱材料:盐生肉苁蓉,内蒙古磴口县产。1.2.3标准曲线绘制称取松果菊苷标准品20mg,置50m试剂:松果菊苷标准品(中国药品生物制品检定所,纯度容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀。分别吸取上述溶≥99%);Dl01型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂);甲液0.20.40.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6,1.8、2.0ml置于25醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等均为国产分析纯ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。以甲醇作测定空白,在主要仪器:T-1810紫外可见分光光度计(北京普析通38mm波长测定紫外吸收度(图2)。经线性回归处理得标用仪器有限责任公司);FW-100高速万能粉碎机(北京中兴准曲线:y=46.785x+1.1447。在该方程中,x表示吸光度值伟业仪器有限公司);FA2104型电子分析天平(上海恒平科(OD值),y表示松果菊苷含量(ug/m)。该方程的回归系数学仪器有限公司);标准分样筛(浙江上虞道墟路达仪器厂);r=0.9996,说明自变量与因变量之间存在高度的相关关系HH-S恒温水浴锅(江苏金坛恒丰仪器厂);YX-A高速大25y=46785x+1147容量电动离心机(江苏金坛环字科学仪器厂)。r=09931.2试验方法1.2.1原料的预处理将烘干的肉苁蓉进行粉碎粉碎粒度收稿日期:2008-11-25基金项目:江苏省农业科学院科研基金(编号:6510605)。作者简介:吴海虹(1976—),女,江苏仪征人,硕士,研究方向为天然中国煤化工产物研究与开发。E-ml:wuhaihongl6@163.com。CNMHG通讯作者:刘春泉,研究员。Tel:(025)84391255;E- mail: leq@js紫外分光光度法松果菊苷标准曲线吴海虹等:肉苁蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影响因素研究251可以作为松果菊苷的标准曲线使用1.2.4样品测定称取肉苁蓉样品10.00g(共4份),用70%乙醇回流提取3次,乙醇用量分别为30m,20ml、20ml,每次1.5h。合并提取液,减压回收乙醇,膏状物用水10ml混合,用水饱和的乙酸乙酯脱脂3次(每次乙酸乙酯用量为E副烂量N40010m),水层再用水饱和的正丁醇举取3次(每次正丁醇用量为10m)。合并3次正丁醇萃取液,减压回收正丁醇,所得稠膏用水5ml溶解加入装有15ml的Dl01的大孔树脂柱顶端反应温度(℃分别用水50ml、甲醇50ml洗脱收集甲醇洗脱液45ml,并用图3反应温度对肉苁蓉苯乙醇苷类化合物提取效果的影响甲醇定容至50ml。精密吸取02ml,甲醇定容至25ml,摇匀,为1:14时,苯乙醇苷类化合物浓度为34.18μg/ml,仅增加在338mm处测定吸收值按松果菊苷冋归方程计算含量225μg/m。该结果说明,比较适合的料液比应大于1:10,1.2.5肉苁蓉苯乙醇苷乙醇回流提取蟛响因素研究但考虑到提取溶剂的用量及成本因素,认为料液比选择1:10125.1反应温度对肉苁蓉苯乙醇苷提取效果的影响称比较适合。取5.0g肉苁蓉干粉加入70%乙醇溶液70m,于40℃、50℃、60℃70℃、80℃恒温加热回流提取2:0h,提取液经浓缩分离之后测定苯乙醇苷类化合物的含量。1.2.5.2乙醇体积分数对肉苁蓉苯乙醇背提取效果的影响称取5.0g肉苁蓉干粉,分别加入70m体积分数为50%2060%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液,于70℃恒温加热回流提取提取时间及浓缩分离方法同上,测定苯乙醇苷类化合5物的含量。1.2.5.3料液比对肉苁蓉苯乙醇苷提取效果的影响称取50g肉苁蓉干粉,分别按料液比为1:6、1:8、1:101:12、图4剩液比对肉苁蓉苯乙醇苷类化合物提取效果的影响1:14加入体积分数70%的乙醇η0ml,提取时间及浓缩分离2.3乙醇体积分数对笨乙醇苷类化合物提取效果的影响方法同上,测定苯乙醇苷类化合物的含量。图5显示,在乙醇体积分数为50%-80%范围内,随着1.z5.4提取时间对肉苁蓉苯乙醇苷提取效果的影响称乙醇体积分数提髙提取液中苯乙醇苷类化合物浓度也增加,取5.0g肉苁蓉干粉,分别加入体积分数为70%的乙醇70浓度范围为27.72-3244Hg/ml,且在该范围内提取液中苯皿l,并于№0℃恒温加热回流提取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、乙醇苷类化合物浓度的增加不明显,说明乙醇体积分数为40h,浓缩分离方法同上,测定苯乙醇苷类化合物的含量。50%~80%对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响不明显。乙1.2.5.5提取次数对肉苁蓉苯乙醇苷提取效果的影响称醇体积分数超过80%之后,提取液中苯乙醇背类化合物浓度取5.0g肉苁蓉干粉,分别加入体积分数为70%的乙醇70开始下降,至乙醇体积分数为95%时,提取液中苯乙醇苷类m,并于70℃恒温加热回流提取2h,提取次数分别为1次、2化合物浓度下降至18.27μg/ml,说明乙醇体积分数超过次3次4次,合并提取液浓缩分离方法同上,测定苯乙醇苷80%之后对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响比较大。因类化合物的含量此,乙醇体积分数选择80%比较适合。402结果与分析2.1反应温度对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响30如图3所示,在反应温度为40~70℃范围内随着反应温度升高提取液中苯乙醇苷类化合物浓度也增加浓度范围为30.19~32.9μg/ml,变化比较小,说明在该温度范围内反应温度对苯乙醇苷类化合物提取的影响不明显。但反应温度超过70℃之后随着反应温度升高提取液中苯乙醇苷类化合物浓度降低。说明反应温度超过70℃之后,不利于苯乙405060708090100醇苷类化合物提取。综合考虑各个因素之后认为选择反应乙醉体积分数(%图5乙醇体积分数对肉苁蓉苯乙酵苷类化合物提取效果的影响温度70℃比较适合。2.2料液比对菶乙醇苷类化合物提取效果的影响2.4提取时间对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响图4显示,在反应料液比为1:6-1:14的范围内,随着中国煤化工围内,随肴反应时间料液比的提高提取液中苯乙醇苷类化合物浓度也增加但在延长也增加,浓度范围为1:6~1:10的范围内提取液中苯乙醇苷类化合物浓度增加32.25CNMHG围内提取液中苯乙比较迅速浓度为2.8-3193ug/ml;当料液比超过1:10醇苷类化合物浓度增加幅度很小,波动幅度仅为3.66之后提取液中苯乙醇苷类化合物浓度增加较缓慢,至料液比μg/ml。说明当提取反应超过1h之后对苯乙醇苷类化合物252江苏农业科学2009年第1期3结论盐生肉丛蓉经乙醇回流提取、浓缩、乙酸乙酯脱脂和正丁醇萃取有效成分等步骤再经大孔树脂D01吸附,甲醇洗脱采用紫外分光光度法测定肉丛蓉中苯乙醇苷类化合物的含量。经线性回归处理得标准曲线为y=46.785x+1.1447。在该方程中x表示吸光度值(OD值),y表示松果菊苷含量提取时间(h)(μg/m)。该方程的回归系数为0.9906,说明自变放与因变图6提取时间对肉苁蓉苯乙醇苷类化合物提取效果的影响量之间存在高度的相关关系,可以作为松果菊苷的标准曲线提取效果的影响不大,因此,比较适合的提取时间为2h使用2.5提取次数对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响对肉苁蓉苯乙醇苷回流提取影响因素的试验研究表明,由图7可见,在提取次数为1~4次范围内随着提取次反应温度选择70℃、乙醇体积分数选择80%提取料液比选明提取次数对苯乙醇苷类化合物提取效果的影响比较大,但拳称取时间选择2h提取次数选择2次比较适合。度范围为3155-5229μg/ml,增加幅度为20.74μg/ml。说过多的提取次数将消耗很多时间及能源,综合考虑认为比较1]刘秀华,李芸张晶.肉苁蓉属植物的化学成分研究进展适合的提取次数为2次。[J].兰州医学院学报,2004,30(3):96-97[2]靖会佐建锋,李教社,苯乙醇苷类化合物的药理研究进展50[刀].时珍国医国药,2006,17(3):40-441[3]宋志宏屠鹏飞,赵玉英,管花肉苁蓉的苯乙醇苷成分[].中草药,2000,31(11):808-810.[4]Sato A, Kozima S, Kobayashi K. Pharmacological studies on sistan-20chis herba. I Efects of the constituents of cistanchis herba onnd leaming behavior in chronic stressed mice[ J]. Yakugakuzasshi,985,105(12):l134-1137提取次数图7提取次数对肉苁蓉苯乙醇苷类化合物提取效果的影响欢迎订阅200年《江苏农业科学》邮发r8-10《江苏农业科学》是由江苏省农业科学院主办的综合性农业科技期刊为双核心期刊(中国科技核心期刊全国中文核心期刊),荣获第三届国家期刊奖提名奖第二届国家期刊奖百种重点期刊奖、全国优秀科技期刊、江苏省双十佳期刊江苏省优秀期刊、全国农口学会优秀期刊华东地区优秀期刊等。主要刊登国内最新农业科技创新和研究成果方面的研究论文时效性强发表周期短适合农业科研人员、农业行政管理人员、农业技术推广人员、农业企业管理人员、生物与农业院校师生以及农民等阅读。《江苏农业科学刊载的文章科学性强论证严谨,在学术上多有新的见解与发展而且通俗易懂是您从事农业科研、农技推广、农业管理跟踪农业科技,实现科学致富的良师益友。《江苏农业科学》是双月刊逢双月5日出版大16开,320页。国内外公开发行,刊号:CN32-1214/S、BSN100-1302(国际)邮发代号:28-10。每期定价20.00元,全年120.00元,半年60.00元地址:南京市孝陵卫钟灵街50号邮编:20014网址:hp:/ jsnykx..jas.ac.cn电话:(025)84390282E-mail中国煤化工CNMHG