聚乙二醇化重组复合干扰素对小鼠免疫功能的影响研究

152中国生化药物杂志Chinese Joumal of Biochemical Pharnaceutics 2007年第28卷第3期聚乙二醇化重组复合干扰素对小鼠免疫功能的影响研究赵媛',赵伟',姚文兵',赵艳玲，高向东'(1.中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京210009; 2.解放军第302医院，北京100039)摘要:目的研究聚乙二醇化重组复合干扰素(PE-IFNcom)对小鼠免疫功能的影响。方法以重组复合干扰素(IFNcon,商品 名:干复津)为对照,分别采用鸡红细胞吞噬法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定巨嗜细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖作用,以3H-TdR掺入法测定刀豆蛋白A(Con A)诱导的淋巴细胞增殖活动。结果PEG IFNeon能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,显著改善环磷酰胺所致的小鼠淋巴细胞功能降低作用,在50~ 150 rg/mL剂量范围内亦能增强小鼠Con A诱导的淋巴细胞增殖反应。结论PEC-IFNeon 可显著增强小鼠免疫功能。关键词:聚乙二醇化复合干扰素;复合干扰素;巨嗜细胞吞噬;淋巴细胞增殖;免疫功能中图分类号:R978.7; R965文献标识码:A文章编号:1005-1678(2007 )03-0152-03Study on the effect of pegylatied recombinant consensus interferon onimmuno-function in miceZHAO Yuan' , ZHAO Wei' ，YAO Wen-bing' ，ZHAO Yan- ling2 , CAO Xiang dong'(1. School of Life Science and Technology, China Pharmaceuical University， Nanjing 210009，China;2. No . 302 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100039, China )Abstract: Purpose To study the efcts of pegylated recombinant consensus interferon( PEG-IFNcon) onthe immuno-function of rats . Methods The tests were carried out with the PEG- IFNcon by contrast of recombi-nant consensus interferon( Infergen , IFNcon) . The chicken red blood cells( CRBC) phagocytosis assay and theMTT assay were used to evaluate the phagocytic ability of peritoneal macrophage( Mφ )and lymphocyte prolifer-ation respectively. Proliferation of splenocytes in response to ConA was detected by 3 H-TdR labeling.Results PEG- IFNcon significantly increases the phagocytic of peritoneal macrophage( Mq) , remarkably revers-es, the immunological inhibition caused by cyclophosphamide and assists the proliferation of lymphocyte in-duced by ConA at the dose of 50- 150 ug/ mL. Conclusion PEC IFNcon could significantly stimulate the immu-nity function in mice.Key words:pegylated consensus interferon; consensus interferon; the phagocytic ability of M中; lympho-cyte proliferation; immuno-function20世纪90年代以来，干扰素聚乙二醇化技术毒作用通过抑制病毒复制及广泛的免疫调节双重模发展迅速,并已成功应用于临床。聚乙二醇化干扰.式对病毒进行抑制,其免疫调节功能通过包括激活素(PEG-IFNcon)理化性质及药动学性质与未修饰干T 辅助细胞;激活抗原提呈细胞等多种途径进扰素相比均有显著变化叫。与目前临床常用的乙肝行(23。 本文以相对分子质量(M,)为40 000的支链治疗药物核苷和核苷酸类似物抗病毒单---作用模式型PEG-IFNcon和未经修饰的重组复合干扰素(IFN-抑制病毒DNA逆转录不同,a干扰素( IFN-a)的抗病con,商品名:干复津)为研究对象,观察对PEG-IFN-col1中国煤化工收稿日期: 2006-05-15; 修回日期: 2006-06-28THC NM !!药科大学生命科学基金项目:“十五*863计划(No. 20422380作者简介:赵媛(1981-),女,北京人,在读硕士研究生，主要从事与技术学院,批号:050201;IFNcon注射液(商品名:生物新药开发研究;姚文兵,通信作者,教授,博士生导师,Tel; 025-干复津),日本山之内制药株式会社,批号:040703;83271225, E-mail: wbyao @ cpu. edu. en。谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)、谷氨酸草酰乙酸转氨中国生化药物杂志Chinese Joumal of Biochemical Pharmaceutics 2007年第28卷第3期153酶(GOT)测定试剂盒,北京北化康泰临床试剂有限数/巨噬细胞总数)x 100%(1)公司;环磷酰胺(Cy)粉针剂,江苏恒瑞医药股份有限吞噬指数=被吞噬鸡红细胞总数/巨噬细胞公司,批号:01060821;植物血凝素(PHA),Sigma公总数司,批号:L8754。2.4 PEG-IFNcon 对Cy导致的免疫低下小鼠腹腔巨二氧化碳孵箱,Shel-Lab公司;培养瓶,Tunclon噬细胞吞噬功能的影响公司;培养板96孔板, Corming公司。实验设正常对照组、Cy模型组、Cy+IFNcon组、BALB/c小鼠,体重18~22 g,雌雄各半,中国生Cy+ PEG-IFNcon组。每组10只，腹腔注射给予小鼠物制品检定所动物中心,动物合格证号:SCXK11-00-Cy 15 puy/kg,1次/d,Cy连续处理4d后皮下注射给0010。药,每次0.4 mL/只,Cy + IFNcon 组1次/d,Cy +2方法PEG-IFNcon组1次/2d。给药第6天处死动物取2.1 PEG-IFNcon体外对正常小鼠淋巴细胞增殖反样。取样及测定方法同2.3项。应的影响2.5数据分析取健康成年雌性小鼠脾脏,制备单细胞悬液,以试验数据以(无士s)表示,以t检验法计算各组20%小牛血清的RPMI 1640液稀释细胞至5x 106/间数据差别的统计学意义,P<0.05差异显著,P0.05);各组心、对ACE有抑制作用,但在体内不能发挥降压作用，脑、肾等脏器ACE活性比较无显著性差异其原因主要是多肽被体内消化酶(消化系统等)降解(P>0.05)。或不能被吸收[7]。本研究表明玉米降血压肽能明显2.4玉米降血压肽对 SHR血浆AngII 的影响抑制体内外ACE活性,而且对不同部位的ACE抑制连续给药12周后,对照组、卡托普利组及玉米作用不同,其原因尚需通过进一步的药物吸收及代降血压肽低、中、高剂量组SHR血浆中AngII浓度分谢动力学研究来阐明。别为:(1 278土141),(567 士75),(598土63),(764土参考文献:26),(965土61)pg/mL(n=8)。可见,玉米降血压肽[1]赵海珍,陆北新,刘战民.天然食品米源的血管紧张素转换酶抑各剂量组和卡托普利组SHR血浆AngI浓度显著低制肽的研究进展[J].中国生化药物杂志,00.25(5);315-317.[2] Yamanoto N. E Masahiro, M Seichi. Biogenic peptides and their polen-于对照组(P<0.01),与卡托普利组比较,玉米降压tial use[J] Curr Pharm Desi ,2003 ,9(1): 1345-1355.肽高剂量组Ang II浓度无显著性差异(P> 0.05),中.[3] 曹文红，秦九明，章超桦,等.中国毛虾ACE抑制产物的酶法制剂量和低剂量组则差异显著(P<0.01)。备及其降低原发性高血压大鼠血压的效果[J].中国生化药物3讨论杂志,2005.26(6) :39-343.ACE催化AngI转化成具有强收缩血管作用的.[4]陈河如,徐志诚.测定心血管紧张素转化酶抑制剂体外抑制动力学的反相HPLC法[J]分析测试学报，199,18(1):69-.1.AnglI ,导致血压升高,而ACEI通过抑制ACE活性[5] Owens G K, Radinovich P S,Schwartz s M . Smoouh muscle cell hyper-而抑制血压升高。ACEI 对ACE为竞争性抑制，但.trophy versus hyperplasia in hypertension[J]. Proe Natl Acad Sci,AHP对ACE的抑制机制文献报道不一,作者认为其1981 ,78(12) :79-77636.抑制机制可能与降血压肽的结构关系密切15-6)。本[6] Corvol P, Michaud A,Soubrier F,et al. Reent advances in knowledge研究表明,玉米降血压肽对ACE为竞争性抑制。of the structure and function of the angiolensin I convering enzyme[J].J Hypetens, 1959.13(3) :S3-S7.ACE主要存在于血管、肾、脑、肺等的内皮细胞、[7] Fujia H, Yokoyama K, Yoshikawa M. Casficationin and anihyperten-上皮细胞、神经上皮细胞、平滑肌细胞、血浆和体液.sive of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from中,种属变异不大。研究证明,许多降血压肽在体外food proteins[J].J Food Sc:,000,65(4) :564-569.(上接第154.页)[3] Brassard D L, Grace M J, Bordens R W, Interferon-alpha as an im-infection[J]. Expert Opin Pharmacother ,2005 ,6(8) : 1373-1380.munotherapeutic protein[J].J Leukoc Biol ,2002,71(4) :565-681.[8] Chan H L, Leung N w ,Hui A Y,et al. Aranomized, cotroldl trial of司传平.医学免疫学实验[M].北京:人民卫生出版社,999:659. .， fnr crhmonie hentitis B:comparing pegylated inter-[s]陈奇. 中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社, 1993:中国煤化工。aone[J]. Anm Imtem Med,750.751.YHCNMHG[6] 万漠林.慢性乙型肝炎治疗的现状及前景[J].中华传染病杂[9] FeldJ,LeeJ Y,Locarmini 5. New targets and possible new therapeutic志,2002 ,20(1):57.approaches in the chemotherupy of chronic hepatitis B[J]. Hepatology,7] Cooksley W C. Peginerferon alpha2a for the treatment of hepatis B2003 ,38(3):545-553.