紫草提取工艺研究

中药与临床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013:46)·1l炮制制紫草提取工艺研究谈静',方芳2,郑琰!,袁强华2摘要]目的:研究不同提取温度、提取方法对紫草中有效成分的影响,优选紫草中蔡醌类成分的提取工艺。方法釆用分光光度法测定紫草提取液中总基醌含量,比较渗漉、回流、温浸(65℃)、超声、浸渍方法的提取效率,采用L叭(3正交试验,以总醌的含量作为指标,以匚醇用量、浸泡时间和浸泡次数为考察因素,优选紫草的醇提工艺条件。结果:回流对萘醌类成分的破坏明显,其余4种提取方法以渗漉法、温浸法(65℃)提取率最高,各方法之间无显著差别;优选的醇提工艺为:加10倍量95%匚醇,浸泡2次,每次1小时。结论:浸濆法节约能源,对设备要求低,操作苘便,转移率高,优选的提取工艺稳定、合理、可行,适用于工业化生产[关键词]紫草;总蔡醌;正交试验;提取工艺[中图分类号]R283[文献标识码]A[文章编号]1674926X(201306-00403Study on extraction process for Radix Arnebiae/ TAN Jing I, FANG Fang 2, ZHENG Yanl, YUAN Qiang-hua2 (lAfiliatedhospital of Chengdu university of TCM, Chengdu 610072, Sichuan; 2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075, Sichuan)[Abstract] Objective: Study on the influence of the different extraction temperature and extraction method for effectivecomponents in Radix Armebiae to select the optimal extraction process of naphthoquinone in Radix Arnebiae. Method:Spectrophotometry was used to detect the naphthoquinone in Radix Arnebiae and the extract rates by percolation, reflux, soak(65C), ultrasonic and dip method were compared with L9 (3)4 orthogonal test, the alcohol extraction conditions of RadixArmebiae was optimized with naphthoquinone content as the index, and the amount of alcohol, extraction time, extraction times asthe investigation factors. Result: Among the five methods, naphthoquinone was destroyed by percolation obviously. The extractionrate of naphthoquinone were higher in sample prepared by soak(65"C )and dip methods with no significant difference among thepreparation methods. The optimal alcohol extraction conditions were as following: dipping extracting 2 times with 10-fold 95%alcohol, 12 hours for each time. Conclusion: The dip method is simple and save energy and has lower demands for equipmentsThe optimum extraction process is stable, feasible and reasonableIKey words] Radix Armebiae: naphthoquinone; orthogonal test; extraction process紫草为紫草科植物新疆紫草 amebicα uchoma度影响较大,目前报道多釆用高浓度的乙醇(Roν le)Johnst.或内蒙紫草 Arnebia guttata Bunge的干燥提取,但提取方法不一,有回流法、浸渍法、根。性寒味甘、咸,入肝、心经,具有凉血活血渗漉法等,不同方法对成分的破坏影响差别较解毒透瘀的功效。现代药理学研究表明,紫草大”,为了合理有效地进行紫草有效部位的提具有较好的抗炎抑菌、抗生育、抗氧化、抗肿取与制备,主要针对羟基萘醌类总色素的不稳定瘤、降血糖、保肝护肝和对心血管系统的作用性,以左旋紫草素为对照品计算羟基萘醌总色抗炎抑菌作用是紫草的传统药效,即消炎素含量,比较不同提取温度、提取方法对紫草中有收敛和解热的作用,紫草中抗炎成分主要存效成分的影响,并采用正交试验对紫草的醇提条件在于醇提物中,紫草醇提物的抗炎抑菌效果明进行筛选。显好于水提物的抗炎效果。乙酰紫草醌紫草醌、去氧紫草素等萘醌类色素为紫草的1仪器与试药主要有效成分。萘醌类成分极不稳定,受温岛津UV-210A紫外分光光度仪(日本岛津公司);AS10中国煤化工奥特赛恩斯公作者单位}1成都中医药大学附属医院,四川成都61002:2司):BP2CNMHO分之一,德国2成都中医药大学,四川成都610075sartorius公司);JA2003电子天平(千分之一,上海收稿日期]2013-07-31精密仪器公司)。中药与临床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013:4(6左旋紫草素对照品(批号:110769-200405,中时,粉碎(过三号筛),取3份,每份约1.0g,精密国药品生物制品检定所);乙醇为色谱纯、称定,置250mL量瓶中,加95%乙醇至刻度,4小时水为蒸馏水,其余均为分析纯。紫草饮片购于四川内时时振摇,滤过,即可新荷花中药饮片股份有限公司,质量符合《中国药2.2.2样品测定按照“2.1.2”项中样品测定方法,测典》2010年版一部“紫草项下饮片“新疆紫草”的有关定各工艺条件下紫草中总萘醌的含量,结果见表1规定。表1紫草不同提取方法的实验结果(x±S,n=3)序号提取方法羟基萘醌总色素含量(mgg)RSD(%)转移率(%)2方法与结果饮片36.880.392测定方法2渗漉法31.10±0.0.70采用紫外-可见分光光度法,检测波长3温浸法(65℃)31.54±0.2516nm回流法1,7579.392.1.1标准曲线的制备取左旋紫草素640mg,精2.3实验结果(1)以羟基萘醌总色素含量为评价密称定,加95%乙醇使溶解并定容至50mL,摇匀,指标,三种方法提取率温浸法(65℃)>渗漉法>回即得对照品溶液(0.128mg/mL)。精密量取该对流法,但实际三种提取方法的提取率相差不大,说照品溶液05、10、1.5、20、2.5、30mL,分别置明采用95%乙醇作溶媒可以达到较好的提取效果10mL量瓶中,用乙醇定容至刻度;以95%乙醇为(2)三种不同提取方法得到的供试品溶液与空白对照,分别于56m处测定吸光度,以左旋紫饮片供试品溶液和左旋紫草素对照品的紫外吸收光草素含量(mg)为横坐标,吸收度为纵坐标进行谱比较可知,回流法得到的供试品溶液与左旋紫草线性回归,计算得回归方程:Y=22826X+00059素对照品的紫外吸收图谱不一致。说明乙醇回流温(r099,结果表明,含量在00640.384mg范度下易对羟基萘醌总色素产生破坏;渗漉法与温浸围内,其吸收度线性关系良好。法(65℃)的羟基萘醌总色素提取率差别不大,说2.12样品测定方法精密称取紫草饮片,按照各工明紫草醇提可在常温下进行。因此确定在常温下采艺方法、实验条件进行提取,精密吸取各样品溶液用95%乙醇对紫草进行提取,并进一步对提取的方2mL,置50mL量瓶中,加95%乙醇稀释并定容至刻法、95%乙醇用量、提取时间、次数等工艺参数进度,按照“标准曲线制备”项下方法进行样品测定,行考察,确定最佳提取工艺。据回归方程计算出紫草样品中总萘醌的含量。23紫草提取方法筛选22紫草醇提温度考察23.1不同提取方法样品制备2.2.1不同醇提温度样品及饮片样品制备方法1:超声法方法1:渗漉法取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取3取3份,每份100g左右,精密称定,加95%乙醇份,每份100g左右,精密称定,经加95%乙醇,渗3000oL,超声提取1小时,放置4小时,时时振摇漉2次,24小时/次,15倍/次,合并提取液定容至滤过,收集滤液并定容至3000mL。3000mL。方法2:浸渍法方法2:温浸法(65℃)取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取3取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取3份,每份100g左右,加95%乙醇300,常温下份,每份100g左右,精密称定,加95%乙醇,浸泡2浸泡1次,48小时次,滤过,收集滤液并定容至次(65℃),时时振摇,1小时/次,15倍/次,合并3000mL。提取液定容至3000mL。方法3:渗漉法方法3:回流法取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取3取紫草适量,粉碎成粗粉(过一号筛),取3份,每份101Q5%71nnmL,渗漉2次份,每份100g左右,精密称定,加9%乙醇,回流24小时次,中国煤化工3000mL。提取2次,第1次2mi,第2次10mim,15倍,合232样品测CNMH品测定方法,测并提取液定容至3000mL。定各工艺条件下紫草中总萘醌的含量,结果见表饮片样品的制备:取紫草适量,在50℃干燥3表3不同提取方法的实验结果(x±S,n=3)中药与临床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013;4(6)13序号提取方法羟基萘醌总色素含量(mgg)RSD%浸渍法30.51±0.330.84KI105.799938941210546滲漉法31.10±0.50K2102.12109.13112.551080323.3实验结果3种提取方法得到的羟基萘醌总色K3110.2610966111.5010468素含量以渗漉法最高,但实际差别不大,与文献2R2.713.436.141.12报道基本一致。超声提取与浸渍提取相比,虽提取表6紫草醇提正交试验方差分析时间短,但提取率略低,且超声提取对设备要求高,方差来源离差平方和自由度方差F值显著性能耗大,超声过程影响因素不易控制;浸渍法提取5.545.41略低于渗漉法,但综合比较来看,浸渍法作为提取萘22.3410.1710.90醌类成分初始提取方法,可以节约能源,而且对设备35.7134.87要求低,操作简便,转移率高,更适用于工业化生D(误差e)20321021.00产,故以95%乙醇为溶媒,釆用浸渍法对紫草进行F005(2,2)=1900,·显著性,F001(2,2)9900,·极显著性提取。2实验结果由表5直观分析结果可知,影响提24紫草醇提工艺优选取效果的因素顺序为:C(浸泡次数)>B(浸泡根据紫草萘醌类成分的理化性质及上述实验结时间)>A(乙醇用量),确定最佳醇提工艺为:果,参考相关文献,确定紫草用95%乙醇提取,以A3B3C2;由表6方差分析结果可知,C因素(浸泡次左旋紫草素为对照品计算羟基萘醌总色素含量,对数)影响显著,B因素(浸泡时间)与A因素(乙醇常温下紫草的醇提取方法进行优选。用量)无显著影响;为节约资源,降低工业化生产24.1紫草醇提正交实验选用正交试验法,以95%的成本,A3调整为A1,将B3调整为B1,因此优选醇乙醇为溶媒,对影响紫草醇提的主要因素:乙醇用提工艺为ABC2,即加10倍量95%乙醇,浸泡2次量、浸泡时间、浸泡次数进行考察,上述三个因每次12小时。素,各取三个水平,进行I(3)正交试验,筛选紫草24、3紫草醇提验证试验取紫草250g,共三份,按醇提工艺条件。因素水平设计见表4照正交试验优选的提取工艺进行验证试验,滤液定表4紫草醇提因素水平表容至5000mL。结果见表7。因表7醇提验证试验结果(n=3)A乙醇用量(倍)B浸泡时间(小时)C浸泡次数(次)D空白试验号羟基泰醌总色素含量(mgg)平均值(mgg)RsD(%)38.882.2138.21称取紫草100g,按正交试验设计表的条件进行结果:羟基萘醌总色素含量平均值为38,l0mg冷浸提取试验,提取液滤过,用95%乙醇并定容至RSD=221%,表明该工艺稳定可行。4000mL。正交试验结果见表5,方差分析见表6表5紫草醇提正交试验结果n=3)3讨论因素试验结果关于紫草的提取方法,曾有不少文献报道采用ABcD羟基萘醌总色素含量Y(mg)乙醇回流的方法提取,乙醇浓度从65%-95%不等,2886本文采用高浓度乙醇回流的方法得到的提取率达到279.39%,但回流法得到的供试品溶液与左旋紫草782素对照品的紫外吸收图谱不一致,可见羟基萘醌总33.52色素已被破坏,单纯采用吸光度计算羟基萘醌总色素含量的中国煤化工中有效成分的得31.92失,应结合HHCNMH GLO图谱进行比较37.00分析(下转第4页)44中药与临床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013;4(6)性峻力猛以攻邪,即肿瘤防治中常用的“以毒攻毒导意义。并且中医药学的在历史上有着不可替代的之法”。临床上可根据患者具体情况,在正气尚未衰地位,研究整理李时珍《本草纲目》对肿瘤疾病的竭而能耐攻的情况下,可借其毒性抗癌,但是由于经验,硏究具有一定的价值和实用性,然而治疗肿肿瘤病人正气多已受损,其治不耐一味猛烈攻代,瘤疾病的药物与治法的研究涉及面很广,任重而道故有毒之药的应用,应适可而止。要根据患者的体远,仍有许多工作要努力去完成。质状况和耐攻承受能力,把握用量、用法及用药时间,方能收到预期的治疗效果。另外,以毒攻毒法参考文献]应较少单独全程用于治疗肿瘤,宜多在扶正培本的1]明李时珍本草纲目M北京人民卫生出版社200基础上佐以有毒药物配伍使用,总之应慎而用之。[2]刘伟胜,徐凯肿瘤科专病中医临床诊治M北京人民卫生出版社,20053.4结语[3]李家庚屈松柏中医肿瘤防治大全[M]北京科学技术文献《本草纲目》中蕴含大量对今后研究肿瘤相关出版社,19944[4]杨金坤现代中医肿瘤学M]上海:上海中医药大学出版社,疾病以及抗肿瘤药物的开发方面有确切而有价值的2007,8386内容,对现今后的肿瘤疾病的研究都有着重要的指(责任编辑王家葵)(上接第13页)参考文献[6]吴学渊刘萍正交试验设计优选紫草的醇提工艺门中国医[帅冬华紫草中化学成分及药理作用的研究进展[门中外医院用药评价与分析,2008,8(10):750.疗,2009,(22):103η]校合香,万明陈洪燕等均匀设计优化紫草的醇提工艺[[2]刘虹陈海生新疆紫草化学成分与药理作用的研究进展中国医院药学杂志2008,28(1):381药学实践杂志,2009,27(3):16[8]刘晓华,易建勇紫草提取纯化工艺优选及稳定性研究[J中[3]赵雪梅王桂玲紫草有效成分的提取及其抗炎作用的研究药材,2001,24(5):3571[中药药理与临床,2008,24(4)-369]杨秀芳正交实验法优选紫草的提取工艺[J中成药,[4]赵雪梅邓文紫草不同提取物抗炎及抑菌作用实验研究门2005,27(3)35l1时珍国医国药,2008,197):1603[l0冯文文李国玉,谭勇等新疆紫草中萘醌类成分的提取工[5]阴健郭力弓中药现代研究与临床应用[M]北京学苑出版艺研究[石河子大学学报(自然科学版)201129(1):67社,1993:6341(责任编辑:胡慧玲)(上接第33页)成分分析居多。本实验在藏医药理论指导下,结合[参考文献]其功效,通过实验证明渣驯对小鼠无水乙醇型胃溃索南邓登童丽袁冬平等传统藏药渣驯的文献研究[]中疡模型有治疗作用,能明显降低胃蛋白酶活性,而国民族民间医药2012,2(4):8.降低胃液总酸度作用较小,推测可能与药物降低胃2]蒋毅萍吴航宇朱汉等胃可宁对实验性胃溃疡的影响J中药药理与临床,2003,195):37.液分泌总量而降低胃蛋白酶活性有关。渣驯抗无水B周源,刘英交郭智等獐芽菜菩苷对乙醇致小鼠臂溃疡的保乙醇胃溃疡的作用机制与其它功效有关药理作用有护作用[J中国新药杂志,2008,17(20):1768待于进一步研究。(责任编辑:陈思敏)中国煤化工CNMH