HPLC法测定乙酰甲喹和喹乙醇的方法研究

饲料检测HPLC法测定乙酰甲喹和喹乙醇的方法研究周艳飞李浛王亚芳北京市兽药监察所摘要建立高效液相色谱法测定恩诺沙星制剂中非法添加的乙酰甲喹与喹乙醇的检测方法。色谱柱为 Atlantis仍35μm4.6mm×250mm,流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(pH4.0)-乙腈(72:28),流速1.0mlJ/min,检测波长365m,进样量10μL。结果表明:乙酰甲喹的线性范围为10~90μg/mL,线性方程为Y=29426X-11824(r=0.99993);喹乙醇的线性范围为10~90μg/mL,线性方程为Y=26290X7254.3(r=0.9994)。该方法中乙酰甲喹回收率为99.00%~100.07%,相对标准偏差<0.8%;喹乙醇回收率为917%-10027%,相对标准偏差<0.·6%。结果表明,方法准确可靠,适用于恩诺沙星制剂中非法添加的乙酰甲喹与喹乙醇的检测。关键词高效液相色谱法乙酰甲喹喹乙醇恩诺沙星制剂检测中图分类号:S816.17文献标志码:B文章编号:1002-2813(2013)04-0067-03恩诺沙星属于兽用第三代喹诺酮类药物,称为于中国兽医药品监察所。氟诺酮类药物,是广谱抗菌药,目前成为兽医临床1.1.2供试品最常用的一类抗菌药物,在感染性疾病的治疗中发恩诺沙星可溶性粉,规格为100g:5g,批号为挥了非常重要的作用。喹乙醇和乙酰甲喹都具有广1126,来源于北京中农华正兽药有限责任公司;谱抗菌作用,而喹乙醇具有蛋白同化作用,可以提恩诺沙星注射液,规格为5mL:0.125g,批号为高饲料转化率与瘦肉率,促进动物生长。0110101,来源于北京立时达药业有限公司;恩诺近年来,一些不法分子在兽用制剂中非法添加沙星溶液,规格为100mL:10g,批号为20120207,非处方物质,如:大量添加抗生素和抗病毒化学药来源于北京瑞先农科技发展有限公司。物,极易造成耐药性的产生与动物性食品中药物残11.3试剂留,最终给人类的身体健康造成了危害。文章旨在甲醇,色谱纯;超纯水;磷酸二氢钾,分研究建立高效液相色谱法测定非法添加的乙酰甲喹析纯。和喹乙醇的分析方法。1.2仪器1材料与方法Waters高效液相色谱仪(c2695泵,298检测1.1试验药品器);超纯水机, MILLIPORE;电子天平, METTLER1.1.1对照品TOLEDO XP205;酸度计, METTLER DELTA320喹乙醇对照品,含量为99.5%,批号为1.3试验方法H061103,来源于中国兽医药品监察所;乙酰甲喹131色谱条件对照品,含量为99.6%,批号为Ho0111008,来源色谱柱为 Atlantis9T35μm4.6mm×250mm,流动相为0.01mL磷酸二氢钾溶液(pH40)-乙收稿日期:2012-12-31腈(69:31),第一作者:周艳飞,E-ml:dy92163cm进样量10μL。H中国煤化工长365m,CNMHG饲料研究 FELD RESEARCH NO04.201167饲料检测1.3.2溶液制备11824,r=0.99993;喹乙醇线性方程为Y=13.21稀释液制备26290X-72543,r=0.9994,结果表明线性关称取1.22g磷酸二氢钾,加900mL水,溶解系良好。线性图见图1和2。后调节pH至4.0,加100mL乙腈,摇匀,即得。300万250万13.2.2对照品储备液的制备00万称取25mg喹乙醇和25mg乙酰甲喹,精密称150万100万量,置于同一100mL量瓶中,加适量稀释液,超50万声溶解后稀释至刻度,摇匀。1.3.23对照品溶液的制备质量浓度/(μg·mL)精密量取2mL对照品储备液,置于10mL量瓶图1乙酰甲嗤线性图中,加稀释液稀释至刻度,摇匀。此溶液质量浓度250万为50μg/mL。00万1324对照品添加溶液的制备想150万100万精密量取2mL对照品储备液,置于50mL量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀。此溶液质量浓度为10μg/mL。质量浓度/(μg·mL)13.25回收样品溶液的制备图2嗤乙酵线性图取05g(或0.5mL)恩诺沙星制剂,分别精2.2精密度密添加喹乙醇和乙酰甲喹20、25和30mg,精密称取对照品溶液,按照色谱条件重复连续进样5量,置于同一50mL量瓶中,加稀释液适量,超声次,测定峰面积,结果表明:乙酰甲喹和喹乙醇峰溶解后稀释至刻度,摇匀;精密量取ⅠmL,置10mL量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀。的峰面积相对标准偏差均小于0.3%,表明此方法的仪器精密度符合要求。13.26检测限样品溶液的制备取0.5g(或0.5mL)恩诺沙星制剂,置;2.3稳定性取对照品溶液,分别在0、2、4、8、16和24h50mL量瓶中,加适量稀释液,超声溶解后稀释至测定峰面积,结果表明:乙酰甲喹和喹乙醇峰的峰刻度,摇匀。面积相对标准偏差均小于0.4%。色谱图见图3。13.27检测限样品空白溶液的制备注:喹乙醇保留时间为2.977mn,乙酰甲喹保留时间为5376mne量取1mL检测限样品溶液,置于10mL量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀。吧0.05013.2.8检测限溶液的制备量取1mL检测限样品溶液,加入一定体积的对照品添加溶液,置于10mL量瓶中,加稀释液稀0010释至刻度,摇匀5006.0072结果与分析时间/mn图3对照品色谱21线性关系24检测限精密量取10、3.0、5.0、7.0和9.0mL对照取检测限溶液,按照色谱条件进行检测,结果品储备液分别置于25mL量瓶中,加稀释液稀释至表明:该法的检测限为200mg/kg(mL)。色谱图刻度。制成质量浓度分别为10、30、50、70和见图4~10。90μg/mL的标准系列,按照色谱条件进行测定,以2.5加样回收率试验峰面积为纵坐标,被测物质量浓度为横坐标绘制标取对照准曲线,得到乙酰甲喹线性方程为Y=29426XYH中国煤化工100%和120%3组加样回收CNMHG备3份平行样,68饲料研究 FELD RESEAR(TNO04.20t3饲料检满!L与对照品平行进样分析,按外标法计算回收率。该方法中乙酰甲喹回收率为9900%-10007%,相对标准偏差<08%;喹乙醇回收率为9.17%-10027%,相对标准偏差<06%。结果见表1和2。0000m040050600700800裹1乙酰甲嗤回收率数据(n=3)添加质量浓度测定参数可溶性粉注射液时间/min回收率图8恩诺沙星注射液检测限色谱相对标准偏差0.10.1100%平均回收率990015相对标准偏差0.0I120%平均回收率100.0799.4499.48相对标准偏差0.40.0002疃乙醇回收率数据(n=3)添加质量浓度测定参数可溶性粉注射液溶液80%平均回收率时间/mn相对标准偏差图9思诺沙星溶液空白样色谱100%平均回收率99.209985相对标准偏差0.平均回收率99.5299.85相对标准偏差三汪0.oN070080000时间/min00005图10恩诺沙星溶液检测限色谱°012030405060103讨论时间/min31色谱柱的选用图4稀释液色谱文章共选用4种型号色谱柱,分别为 Waters0015Atlantis35μm4.6mm×250mm、 Agilent ZORB-AXSB-Aq5μm4.6mmx250mm、 AKZONOBELKromasil10o-5C14.6mm×250mm和 Waters Sym70 metriC5μm4.6mm×250mm,经过试验证明时间/min色谱柱 Waters Atlantis T35μm4.6mm×250mm对图5思诺沙星可溶性粉空白样色谱于各组分的分离度均大于1.5,分离效果最好,柱效高,最终选用此柱进行试验32检测限测定量取1mL检测限样品空白溶液,分别加入需A、,元。0.05、0.1、0.2、0.3、0.4和.5mL对照品添加时间/r溶液,按照色谱条件进行检测,同时记录光谱图图6恩诺沙星可溶性粉检测限色谱与色谱图,添加样品结果的失真质量浓度是0.μg/mL(上机质量浓度),因此将上机质量浓度0.2μg/mL定为该法的检测限,经计算得出检测限为200mg/kg(mL)00400500600700g009001000通信地址:北京市朝阳区安外北苑路甲15号时间/min图7惠诺沙星注射液空白样色谱中国煤化工107CNMHG饲料研究 FEED RESEARCH NO04.201369