蜂胶乙醇提取物基因抗突变作用的研究

第17卷第1期Antagonistic Effect of Propolis蜂胶乙醇on mutation induced提取物基因by Thiotepa Adriacin抗突变and Acridine Orange作用的研究WANG Ju-xiang, PEI Shi-geng, men Jin-e',et王菊香裘士庚门金娥3/田珂3Hebei Engineering College郑海萍冫王延臣3段晓辉Handan 056029, China; 2. Derparment of oto Laryngolog(1.河北工程学院卫生教研室河北邯郸the Affiliated Hospital of Hebei Engineering College, Handan 056000056029;2.河北工程学院附属医院耳鼻喉科China; 3. Experimental Center of the Medical Faculty河北邯郸0560003.河北工程学Hebei Engineering College, Handan 056000, China)院医学部中心实验室,河北邯郸056000【摘要】背景与目的探讨蜂胶乙醇提取物对噻替哌等诱变剂诱发的基因突变旳抑制作用。材料与方法:用Aπes试验检测蜂胶乙醇提取物的诱变性及对噻替哌、阿霉素、吖啶橙诱发的T和ˆω菌株回复突变后的抑制作用。结果:在1-1000μg/蜂胶乙醇提取物对'As和'A菌株未岀现回变菌落数的增高。10~250μg/皿蜂胶浓度岀现中等强度或以下强度抑制(抑制率<75%);000μg皿蜂胶浓度岀现高强度回变菌涪数抑制且对试验所设3种诱变剂诱发的基因突变的抑制作用均有剂量-效应关系。结论:蜂胶对噻替哌等诱变剂所诱发的不同类型的基因突变均有不同程度的抑制作用【关键词】蜂胶;诱变剂;Ames试验;基因突变中图分类号:R394.6文献标识码:A文章编号:1004-616X2005)1-0039-02ABSTRACT] BACKGROUND&AIM: To study the antagonistic effect of propolis on gene-mutation induced by thiotepaand other strong mutagens. MATERIAL AND METHODS: Using Ames-test, the antagonistic effect of propolis to reversemutation of strains TAlco and TA98, which induced by thiotepa, adriacin and acridine orange, were assessed. RESULTS: Thepropolis inhibited all the mutations induced by the three kind of mutagens and showed dose-effect relationship. Dose of10-250 ug/plate of propolis could inhibit mutations by the middle intensity or below (restrain rate 75 %). At dose of1 000 Pg/plate of propolis could strongly inhibit mutations induced by thiotepa, adriacin, and acridine orange. There wereno mutant character of the propolis. CONCLUSION: There were antagonistic effect of propolis to gene-mutation induced bydifferent kinds of mutagen. such as adriacinI KEY WORDS I propolis; mutagen; Ames test; gene mutation蜂胶是蜜蜂从树皮的裂缝和植物的幼芽上采集植1材料与方法物的树脂,加入唾液中的酶和助消化物质以及蜂蜡,经1.1蜂胶从邯郸县某养蜂厂采集新鲜蜂胶,冰咀嚼调制而成的一种树脂状物质。研究表眀蜂胶中含冻粉碎后以95%乙醇浸泡提取ηh,过滤,滤液于40有多种具有抗菌、抗氧化、抗病毒、调节机体免疫功能及℃减压挥干二甲基亚砜(DMSO)溶解定容。防癌抗癌功效的生物活性物质·21,一些国家作为民间1.2Ames试验采用平板掺入法。选用TA和用药有悠久的历史有文献报道蜂胶乙醇提取物对环TA菌株,菌种引自美国Ames试验室,经中国药品生磷酰胺等基因突变具有抑制作用,本文用Ames试验检物制品检定所鉴定菌种特性符合试验要求。均设加与不测蜂胶对噻替哌等诱变剂诱发基因突变的抑制作用。加S4由中国药品生物制品检定所提供)两种情况,TA菌株用H中国煤化工加S时用阿霉素作诱CNMHG收稿日期:2004-04-12;修订日期:2004-08-29基金项目:邯郸市科学技术研究与发展项目(No.04033作者简介王菊香(1963-)汝女,河北省邯郸市人副教授研究方向:卫生检验。Tel:0310-31073820039论著Vol 17 No. 1变剂,TA加S时用吖啶橙作诱变剂。蜂胶提取物设42.2蜂胶乙醇提取物抑制诱变试验当蜂胶浓度个浓度组,将45℃融化表层培养基、菌液、阳性物、各为10μg/皿时对吖啶橙引起的TA(+S菌株回复突变浓度蜂胶提取物、S混合液在灭菌试管中混匀后平铺到率和噻替哌引起的TA(-S)菌株回复突变率均无抑制底层培养基上37℃培养48h记数回变菌落数并观察作用;对阿霉素引起的TA(-S)菌株回复突变率表现菌苔生长情况毎组设3个平行样重复两次。诱变试验为弱抑制,对噻替哌引起的TA(+S)菌株回复突率表结果用每皿回变菌落数和MR值(MR=诱发回变菌落现为中度抑制。当蜂胶浓度为50Pg/皿时除对噻替哌引数/自发回变菌落数)表示,MR≥2并有剂量效应关系起的TA1a(+S)菌株回复突率表现为中度抑制外,对其时为诱变阳性。抗诱变试验结果用诱变抑制率表示:它阳性物引起的菌株的回复突变率均表现为弱抑制。当抑制率=[(阳性物诱发回变菌落数受试物加阳性物诱发回变菌蜂胶浓度为250Hg/皿时,对吖啶橙引起的TA(+S)菌落数)/(阳性物诱发回变菌落数-自发回变菌落数)]×100%株的回复突变仍表现为弱抑制,对其它阳性物引起的菌抑制率<25%为无抑制,抑制率为25%~50%株的回复突变率均表现为中度抑制。当蜂胶浓度为100(不包括50%)为弱抑制抑制率为50%-75%(g/皿时,4个试验组均产生强抑制最高一组(噻替哌引包括75%)为中度抑制邦制率≥75%为强抑制。起的TAm(+S)组)抑制率达到9.78%。直线相关分析13统计分析采用SAS软件对测定结果的剂显示,四个试验组均有剂量效应关系(相关系数TA量-效应关系进行直线相关性分析。S9=0.9684,TAw+S=0.9717,rTA10-S=0.9664,rTA1mS=0.9655均为P<0.05)。见表22结果2.1蜂胶乙醇提取物致突变试验结果蜂胶浓3讨论度在10-10g/皿范围内末引起突变阳性反应(MR许多植物分泌的树脂类物质具有很好的抗菌、防<2)同时也未发现抑菌现象。见表1。腐、防水、隔热等作用可以保护叶、花、果实、幼芽。蜜蜂表1蜂胶对TA和TA1菌株诱发回变试验结果(x±s)Table 1 Inducing mutation of propolis on strans TAIon and TAgsTAus-SyTAos +SyTA-SConcentrationRate ofRate ofRate ofNo, ofNo ofmutation(×10-2)(×10-2)01(×10-2)27.8±3Propolis40.3±3,4121.0±205036.8±3.9157.3±23.31.301.0146.3±3.01.5632.8±4.21.18121.0±12130.8±90.82100038.0±5.31.2837,8±4,0200.9±16.91.66111.6±110.69187.6±17.61.55116.9±14.10.73431,0±21.614,511093.5±52.69.041040.3±50.1Acridine orange488.5±38.5I.36表2蜂胶抑制TA1和TA诱发回变试验结果(x±s)Table 2 Inhibition of propolis on reverse mutation of strains T'Aleo and TAgsTAgs-S,TAos +soTAI-SRate ofRate ofRate ofMLg platesuppressAdriacinsuppresssuppress27.8±3.1121.0±20.3160.3±13.2Propolis280.9±65,37.4377.9±47.624.03±6624.6592.9±81.350.866.8±27.306.5±51.3655.6±61.944.0587.3±77.8199.8±34.657.6264.6±39.048.658.6±44.255.0386.5±62.274.31000113.9±11,979,0102,0±27,083,9164.8±21.995.59.040.3±50Adriacin431.0±21.6Compared with group of different propolis concentration, P<0. 0H中国煤化工(下转第44页)CNMHGCARCINOUVESYS, TERATOC\ESYS MUTALE\EsYy0040论著Vol 17 No. 1化的机率。因此镉本身存在的弱遗传毒性加上它引起「]DlyH, Hartwig a. Induction and repair inhibition of oxidative的DNA修复系统功能改变可能是镉致癌机制的一个重dna damage by nickel( l)and cadmium(II) in mamma要方面。cells [J]. Carcinogenesis, 1997, 18(5):1021-1026参考文献:Escherichia coli( MutT)and human(MTH1)8-oxo-dGTPases toin vitro inhibition by the carcinogenic metals, nickel( Il), copperI1] Hartmann A, Speit G Effect of arsenic and cadmium(Ⅱ), cobalt(Ⅲ), and cadmium(Ⅱ)[J. Carcinogenesispersistence of mutagen-induced DNA lesions in human cell1997,18(9):1785-1791[JI. Environ Mol Mutagen, 1996, 27:98-104[9] Coleman JE. Zinc proteins: enzymes, storage proteins, transcription121 Hartwig A. Role of DNA repair inhibition in lead- andAnn Rev Biochem. 1992admium-induced genotoxiccity: a reviPerspect,1994,102(3):45-[10] Hartwig A, Asmuss M,Eh13] Fatur T, Lah TT, Filipic M Cadmium inhibitsmetal ions with DNA repair processes and cell cycle controlmethylmethane-sulfonate and N-methyl-N-nitrosourea-induced DNAmolecular mechanisms[JI. Environ Health Perspect, 2002damage in Chinese hamster ovary cells[]. Mutat Res, 2003110(5):797-799529(1-2):109-116[11 Hartwig A. Zine finger proteins as po4]蔡永庭,邹介智,瞿永华.简化人全血细胞DNA非程序合成netal ions: differential effects on structure and functionLJI检测化学致癌物研究[J.肿瘤,1988,8(2):77-792001,3(4):625-6345]沈芳兰,张秀珍,李珏声,等.牛磺酸对小鼠抗氧化和DNA[12 Asmus M, Mullenders lh, Eker A,etα. Differential修复能力的作用[J.营养学报,1996,18(3):258-261ffects of toxic metal compounds on the activities of Fpg and[6] Pruski AM, Dixon DR. Effects of cadmium on nuclear integrityXPA, two zinc finger proteins involved in DNA repair[J]nd DNA repair efficiency in the gill cells of Mytilus edulis LCarcinogenesis,2000,21(11):2097-2104[JJ. Aquat Toxicol, 2002, 57(3): 127-37(上接第40页)来诱变中间体,或者抑制癌细胞增殖信号,更重要的是采集树脂并调制成蜂胶后,用来加固巢、填补蜂巢缝隙某些抗癌活性可能是直接阻断接受体或接受体信号与空间、涂抹巢房,还用蜂胶密封已被蛰死而不能清除蜂晈抗突变机制有待进一步深λ研究,以便充分开发这岀巢外的敌害防止其腐烂。可见蜂胶是一种夭然抗菌种夭然抗诱变物质的临床应用价值。防腐物质。国内外大量研究已经从世界各地蜂胶中鉴定出参考文献:300多种化合物多种微量元素和维生素2对其中的某1卢志强,娄红祥.植物活性成分与癌症的化学预防[J.中草些化合物单项研究证明蜂胶中的多种物质具有抗突变药,2002,33(6):563-565抗癌作用,5-,根据蜂胶具有的多种生物活性组分的[2郭伽,周立东.蜂胶的化学成分研究进展J.中国养蜂特点,本文用Ames试验测定了蜂胶的诱变和抗诱变作2000,51(2):17-18用结果显示蜂胶无致突变作用能抑制多种诱变剂诱3韩连堂,王志萍,李佩贤,等蜂胶对环磷酰胺等四种诱发的不同类型的基因突变且无论是否经肝微粒体酶活剂诱发突变的抑制作用[J.中国公共卫生,2001,17(5)406-407化,对阳性物诱发的突变均有拮抗作用,所以可初步认4]周宗灿,傅娟龄,王莹,等.57种中草药甲醇提取物体为蜂峰胶具有广谱的抗诱变作用。外抗突变作用的筛选[J.卫生毒理学杂志,1989,3(4)由于蜂胶抗突变作用的化学成分非常复杂,如酚212-214类、香豆素、黄酮类、萜类、维生素AE、植物固醇及微量5]蔡蕾.食物中非营养成分的生物学效应研究进展[J.国元素等蜂胶抑制基因突变的作用机制也应是一个多方外医学卫生学分册,1995,2(5):277-281面作用的综合过程。如蜂胶具有很好的抗氧化作用可6徐厚铨.环境致突变物和致癌物的抑制剂及其应用们.国以清除氧自由基。其含有的锌可以摻入DNA聚合酶的外医学肿瘤学分册,1989,16(1):26-29合成,促进DNA损伤的无误修复,蜂胶中含有的香豆7刘向前细胞程序死亡和生物黄酮素J中草药,202素、黄酮及酚类可以提高酶系统的活性,促进致癌剂灭活,特别是生物黄酮素,可能通过阻止异源物质的酶8]周土新.超氧化物歧化酶及其金属辅基与恶性肿瘤的关系中国煤化工224):228-231CNMHGCARCINOUVESYS, TERATOC\ESYS MUTALE\EsYy0044