肽合成

54天津药学Tianjin Pharmacy 2011年 第23 卷第5期低,甚至已降至80%以下”。随着微生态学的兴起和到之处。微生态疗法的应用,目前通过动物模型和体外实验研1金新民. 雷贝执唑给疗十二指肠微疡76例的疗效分析.中华临床医参考文献究得到证实,乳酸杆蘭具有抗HP作用[02i,为HP感染学研究杂志,00 ,13(22) :3264的治疗提供了新的思路。2杨新昌. 奥美拉喧与小荣臧等联合治疗消化性胰痛疗效观察.中国潘彤膨(;用嗜酸乳杆菌死菌制剂(乐托尔)联合现代医生,2007 ,17(1):91传统三联疗法治疗儿童HP感染,取得良好效果。对3杨躇军。 奥美拉疃联合呋喃唑酮及阿莫西林治疔+二指肠馈疡疗照组和治疗组均采用奥美拉唑胶囊0.8 mgkg●d",效观察.临床和实验医学杂志,200 ,6(7):52晨空腹顿服;克拉霉素片15 mg/kg.d"', 2次/d;阿莫胡彦飞摔托拉疃.甲硝墮与克拉霉索联合治疗十二指肠球部溃疡合并HP感染100例分析中国设诊学杂志,2008 ,8(3) :651西林胶囊50 mg/ kg.d- ,3次/d,疗程14d。治疗组s直宪伟.三联疗法治疗幽「]螺杆附阳性消化性出揣56例临宋观察。加用乐托尔1包/d顿服。结果治疗组HP根除率为亚太传统医药,0,6(11);4392. 5% (37/40) ,对照组为74.3% (26/35),两组比较6段荐，六君子汤加味治疗+二指肠遗痧30例临床观察云南中医中差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组不良反应发生7陈成家胃康灵胶囊治疗十二指肠遗病50例浙江中西医结合杂药杂志,200.28(4):24率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。忠,20007 ,17(10) :624同时,观察还发现补充嗜酸乳杆菌可以明显减轻治疗8王枕战 胃费灵融抗消化性哉疡复发40例中国中西医结合潮化过程中腹泻恶心等胃肠道症状的发生率,对提高患儿杂志,2010,18(1):59依从性及疗效有一定的帮助。， 张玲霞,张行。马京玲,等荆花四康联合PP三联治疗幽门螺杆蘭马瑙华141观察了奥美拉唑联合米索前列醇治疗用性十二指肠球部积病临床观察.中国医药指南21111)12十二指肠溃疡的疗效。选择确诊为+二指肠球部溃疡10 彭于仑.康复新掖联合潘托拉唑治疗消化性观疡40例疗效观察广西医学,2010.32(2):192患者空腹吞服奧萸拉唑20 mg/次,1次/d;米索前列醇11 胡伏莲幽门媒杆菌耐药及其根除失败原因研究.中国医药导报，800 ug/d,三餐前及睡前分次口服,疗程4周。结果痊20006 ,8(5) :340愈率为87.5% ,总有效率97.9%。12 Sgoure D,Mrnghoudakie P,Petraki K M, al. In vitm and in riro in-总之,治疗消化性渍疡主要包括抗胃酸分泌药和hibien of Helicobacter plori by Labeilue cuei stunin Shirogu. ApplErion Micnbial 2004 ,70(1) :518防御因子增强药,而对由HP感染引起的消化性溃疡,13 潘彤影,朱欢.卢华社.益生苗箱助三联疗法治疗儿童幽门螺杆菌则必须同时应用抗HP药物,需应用质子泵抑制剂加感染疗效观察.海峡药学,2010 22(2);:109两种抗生素的三联方案和三联方案加铋剂的四联方14 马瑞华奥美拉唑联合米索前列醉治疗+二指肠使酱48例疗效分案。同时.中医药或中西医结合治疗消化性溃疡有独析.西南军医,200 ,9(3):21肽合成张字,乌恩',王国成(1.内蒙古医学院药学院,呼和浩特010110; 2. 天津天士力研究院化学药物研究所,天津300402)摘要药用多肽因其涉及范围广、药用活性高、生物利用性好、副作用少等优点正被越来越多的药学工作者列为将来药物发展的主要方向。8前多肽合成方面主要以液相合成为主.本文在查阅大量文献的基础上对肽合成过程中.氨基酸的保护、肽键缩合等常见的方法做了总结，希望为科研工作者对肽类药物开发提供参考。关键词氨基酸保护,多肽合成中團分类号:R914文献标识码:A文章编号:1006-5687(2011 )05 0054405中国煤化工上世纪90年代，多肽领域研究进人--1i传统药物相比,活性肽具有药展阶段。研究表明,生物体内含量极微的活MYHC N M H GF.副作用少等优点。因此活性命过程中起着重要的调控作用1-3) ,这些活性肽与生肽的开发利用引起 了各国科学家包括有机化学家、生物的发育、生长代谢、免疫、疾病学习、记忆和衰老都物化学家 药物化学家、结构化学家等与生命科学有关●收稿日期:201106-13天津药学Tanjin Paraey 2011 年第23 卷第5期ss的科学家的高度重视,近几年,其已发展成为国际市场环肽等副产物， 与目标化合物A-B混在- -起。上的一.大类重要药物0(-06。目前，得到活性肽的途径所以,在肽合成过程中,对不参与肽键形成的所有多种多样,本文主要就合成方面对肽进行简单闹述。官能团必须用暂时、可逆的方式予以保护.即每- -个肽1肽简介键的形成,包括三个步骤:第- .步,对缩合反应中不参两分子氨基酸经脱水以酰胺键联接生成的化合物与反应的活性部分进行保护;第二步, N-保护氨基酸称为肽。肽分子中的酰胺键称为肽键”。由两个氨基的羧基必领先活化为活性中间体,随后于羧基保护的酸形成的肽叫二肽,三个氨基酸形成的肽叫三肽，肽分氨基酸进行缩合形成肽键;第三步,对保护基进行选择子中的每- -个氨基酸部分称为氨基酸残基，开链状的性 脱除或全脱除。肽的自由氨基- -端称为肽链的氨基末端或N端,另- - 2 氨基酸保护端则称为羧基末端或C端。通常把小于10个氨基酸2.1 氨基保护及脱保护 用于氨基保护的保护基数残基的肽称为寡肽或小分子肽, 10 ~ 80(或100)个氨目很多,按其结构可分为烷氧羰基酰基、烷基三大类。基酸残基的肽称为多肽。烷氧羰基是目前应用最广的氨基保护基。表1列举了在温和反应条件下,肽键的形成是通过活化一个几种有代表性的烷氧羰基保护基及脱保护条件。氨基酸(A)的羧基部分,第二个氨基酸(B)则亲核进2.2 羧基保护及脱保护 目 前已知的大多数羧基保攻活化羧基部分而形成二肽。如果羧基组分(A)的氨护基是由一 -级、二级,或三级醇制备的酯。表2列举了基未保护,肽键的形成则不可控制,可能形成线性肽或几种常见的羧基保护基。表1氨基保护基及脱保护条件保护基缩写.结构脱保护条件参考文献苄氧羰基HB/H0Ae,H/Pd/C.Nu/NH,(液) ,HF ,CH,SO,H8叔丁氧贓基.beHCIVHOAc . HCV二氧六环, HF ,TFA ,HBc/ HOA:9-12 .9-药甲氧颜基Fnee种肢溶液，如50%吸呢/CH.C213-15表2代表性的羧基保护基保护基.缩写脱除方法甲基MeNoOH溶液.KOH路液16- 18叔丁基.HCV有机溶剂,HB/HOAe ,IFA .HF(液)等19-20苄基健化氢化、Na/液NH、NaOH溶波、KOH溶被.BF,乙醚2.3側链官能团保护在氨基酸缩合反应中，由于不副反应的发生，在多肽合成中往往也选用适当的保护少氨基酸的侧链.上都带有易参与反应的活性基团，如基将其保护起来。表3列出了几个侧链官能团的常用羟基.巯基、酚基、胍基.咪唑基、吲哚基等。为了避免保护基及脱保护条件。表3侧链保护基及脱除 条件侧链官能团肌基2.对甲苯磺酰基1. 硝基中国煤化工液)23眯唑基1.对甲氧基苯磺酰基CNM HG242. 2.4-二硝基苯基MYH酚基1.节基1. Bo1. H2/Pd. HF. Na/NH,(液)2.叔丁基2. tBu2. TFA, HC疏基1.苄基1. Ba1. Nw/NH(液)262. Np-a天津药学Tanjin Pharmacy 2011 年第23 卷第5期2.4保护基的匹配对于用在一个特定肽合成的各高、经济性好等优点,因此备受当今药学工作者的厚种不同类型的保护基.保护基的选择必须具备正交性，爱。南京农业大学宓鹏程等人[0于2007年成功利用正交的意思就是每- - 类保护基的脱除各不相干。因此法合成出了胸腺五肽(TP5)中间体Fmoc - Tyr(t-此,为获得最佳正交性,各个化学裂解机制应该是不Bu) - WangResin。同的。反应过程中，羧基组分首先与氯甲酸异丁酯在低3肽键的生成方法温下( - 15 C左右)反应生成混合酸酐,然后在叔胺存3.1酰基叠氮物法早在 1902年,就有人将酰基叠在的碱性条件下与氨基组分反应生成肽。反应机理如氮物法引人到肽化学中,因此。该方法是最古老的缩合图3所示。方法之一,在肽縮合反应过程中,叠氮物法对氨基酸很少发生消旋作用,因此，该方法- - 直被肽合成工作者广以是泛使用。最近我国学者李勤耕等(21利用此种方法成功合成出-系列谷氨酰胺类抗肿瘤化合物。MF.CHR'COR叠氮法接肽分为三步,首先，发基部分被甲酯,乙脂、苄酯等保护的肽在室温下进行肼解生成酰肼,然后酰肼在低温(-15C以下)和酸性条件下与亚硝酸化图3混合酸酐法接肽机理物反应生成叠氮物。最后用有机碱调节pH 8 ~9,加入3.3碳二亚胺法在碳二 亚胺法类方法发展过程中，氨基组分完成接肽反应。机理如图1。二环已基碳二亚胺( DCC)首先用于肽合成,并且得到广泛应用,DCC相对便宜,而且可溶于肽合成常用试,NINH, .业的鹏化物.剂,但是用DCC作缩合剂会有二环已基脲( DCU)生成,DCU在水中和有机溶剂中均有- -定的溶解度，致使NH_CHR?COR3在产物纯化过程中很难将其除尽。为此人们开发了水yR溶性的碳二亚胺EDC来代巷DCC,反应完后只需要用酸或水洗涤即可除去反应生成的脲，有效的解决了这个问题。刘国都等l251在合成活性三肽法氏囊素中也图1叠氮法接肽 反应机理用到此方法。.除此以外,人们还发现了-种磷酸酯型缩合试剂碳二亚胺类的缩合试剂机理如图4,缩合试剂先与DPPA,其可以不经肼解,直接由羧基变成叠氮盐。与羧基组 分生成活性中间体,然后再与胺基组分在碱性传统叠氮物法相比,由于其不需要酰肼中间体,简化了条件”下完成肽链增长反应。反应步骤.而且反应条件更加温和,因此受到人们的欢O-me=c=s-D7rcnrmo迎。机理如图2。DCCEDCRCOOH+ N-k-orh --DPFA一士 RCON,r RCONHR'+Hl,+物图4碳二亚胺偶合反应机理圄2 DPPA 接肽机理3.4酰卤法该法类似于有 机化学方法,用酰氯活化忙气条件下形成酰胺,是一种常用3.2混合酸酐法该方 法是指先将保护中国煤化工去在试剂应用中只用于Fmo-羧基制成高活性的混合酸酐,之后与氨基的方法。混合酸酐法是上世纪50年代初期HC N M H Gf Fme在酸性条件下非常稳起来的,开始使用的制备混合酸酐的试剂主要是二米足，的大心价士体内氨基酸很少用该法进行合成，基磷酸,然后是苯甲酸，现在应用最广的是氯甲酸烷基因为多数学者认为酰氯法*过度活泼"且易发生消旋等酯类,主要有氯甲酸乙酯.氯甲酸异丁酯和氯甲酸异丙3.5苯并三唑型(BOP族) 以 BOP为第-代苯并三多种副反应。酯。混合酸酐法具有反应速度快、产物纯度高、产率唑型的缩合试剂可以说是缩合试剂里的- -场革命,因天津药学Tianjin Plarmary 2011年 第23 卷第5期57为其接肽的效率要远远高于DCC,引起消旋的风险也机碱的参与下先与羧基组分反应,生成羧酸的苯并三明显减小。之后,人们又发现了同类型的缩合试剂唑嘴活性中间体，然后再与氨基组分反应生成目标多HBTU、ByBOP .TBTU等。其共同点就是缩合试剂在有肽,如图5所示。.MoN... PF。PF。BFBOPPyBOPHBTUTBTUo-A*.B'Rlcoo.q~^*R,COOH+ DIEA-- + R'coor . HDEA+ H-DIEA+ 'B。R'coo ●HDEA"R'CONIR?←HNR?| RCOOA" +围5 BOP 族缩合试剂接肽机理4结语Biochimia e Bophysica Aelta, 2011, 1814(5):724目前，多肽类药物涉及激素.神经细胞生长和生4李体.多肽药物一 医药市场的亮点。 上海医药,2004 ,25(4).119殖等各生命领城并有直接影响细胞分化、神经质传递、3余志红,鲁保构,向明.生物肽的临床应用及现状分析.中国医象药学杂志2009.29(23) 2034肿瘤病变和免疫调节等多种重要功能[2)。据有关方6 A. Mahnoudia, K. Nsar, M. Khornseha. Can amino scids protect面报道,2008年,全球多肽类药物总销售额已达750 ~boseadish peroxidee sqgin its swicide - perxide subtnle . Enxyme800亿美元,每年还以20%的速度快速增长,肽类药物and Microbial Tecbnobog, 2008 ,43(4 -5): 329.已经成为国际医药市场上的亮点。鉴于此,本文在查7 Yingwei Chiang, Wang Taubsien, Weachie Lee. Chioan coutig fuwthe pratction od amnin meide that wer etnpped witin hnydeganted阅大量文献的基础上,对多肽常见的合成方法进行了fal. Food Hodollodo 2009 ,23(3) :1057归纳总结，希望以此推动肽类药物在治疗疾病中的8 Emneso M. Arbeon , Mario 0, Canigoan . e al. Myeoperie - like应用。amino secid cuntent in the BE8 ancmnte Aulectinia marplaienais, Onulac.-中国煤化工si . Cmpapnie Bicdomin1 Sun Guoying, Gun Chuxing, 2hou Yong Vasacive inte:216e- balances TREM- I/TREM -2 ratio in sente hung iMHC N M H GHM.osal. Pytlheh - terine. amirtory Peptide, 2011, 16(7) :56_tin acid (MAA) iclated from the hem2 Ao Xiwrxiso, Fang Fang, Xu Feng Vaoctive intetial pepide poypie conal Peiloporus capiata. Joumal of Plotochomistry and Potabi-tects alseolar epthelial cells aguinst hyperoxin via pronoting the stivaeology. 2009 ,94(3); 191tion od STAT3. Regulatory Pepide, 2011,168(1-3);110 Zhans Krowchukn, Begonye Vieedo, Victor Flomn,nt al. Prining for JA3 Yohitaka Uimetsu, Takchi Terns. Structural difrerae of vso8ctire- dependent detenses using bexandie seid is a eletive mechanisn lointestinal peptidle in two distinct nembrane - minicking environment.protect Anbidopsis gtint B. cinece. Joumal of Plant Prysiologr 。58天津药学Tnjin Pharnacy 2011 年第23 卷第5期201,168(4); 359conijngte for the tealmemt o connel nevsilanization.. Binserials,Linda K. Friedman, Menahem Sogal. Early expoure of cllured hipp-2009,30 (30) :6026ocampad neuns to excitetory amino ecids prtecdis from later exitonox.9 Tomas Ratvilavici ,Anunae Lapunericius. Selctive inacivaion d Miciy. Int J Dol Naunwcionce. 2010.28 (2) :195-MuLV RT RNae H etiviy by site - deced PECyaion: aen im.12 R Rink, A AkemaMeter, I Bsudoin ,e al. To poet pepide phaume-prred ubiliy w synthe sie long eDNA molecule. New Biechnolog.eutials agint pepidases. Jourmal d Purmacolopiel and Taicologi2011 ,3(2):!2eal Mchode,2010,61 (2): 21020 Jan Chen, Bei Zhang. Ca Xie ,n al. Symubeis of a highly hyropho-13 Trmm Treaktmog. Bend w. Miler. Peperation and dhrderiation ofbie eyeie doxmpepite by solid - phase spuheis of liner popide and出pide cortaining w/o emslion. Inenntional Joumal of Pumacei-edintion in sluion. Chinee Chemieal Leters ,2010.21 (4) :391te,1995,123 (1-2): 199 .21 Y Yoshihan MD, A Plaas, B 0abom BSk,日al. Superfioinal aone .14 Xinging Yin,用Wrigpt, Trerer Wll.as od Brin Endchelidl Cllschendueytos in normal and oscoerchbrte human articuler carilyge相Syntheie Neuoutie Thrombin in Albeime' s Discue, The Americantherise novel tmuacnted forms of inter - alphe - tpin inhibie heeryJoumal of Ptholgy,. 2010,176(3) :211dhains which ateched 如a ehondnoitin aulunte proeogJycan other15 Atouohi Medu, Takayaki Miouno, Mesaneri Bunya,nt al. Chnectedta-than biknin. Otearhris and Carilage ,008.16 (2) 16:1343tion of Novel Celesteral Etense from Tichodermn o AS59 wih High2 Jiapei Wang. Jinnn Hu, Jinhe Cui ,t al. Pricatin and idnifceAhbiliy to Syntheine Sienyl Enter. Joumal of bioscience and biocngition ol a ACE inibtioy pidle fromu oyster poteine hydrolyuate und theneering, 208 ,105(4):341anibyeteasire lfet of hydrlyate in spotaneously hyperensive rate.16 Jin Jing. Huang Weahong. Res Guanging Toul Syuheris of MC2 -日Food Chenisry, 208,1111 (2):302Peptide fom Moenondia Charntie and Is Hpogyceoie Actri. Chi23 李動耕.嘉水鹏.陈建,等叠氮法合成谷氨默胶类化合物及其抗肿nese Joural of Neural Medicies ,2011, 9(1):58瘤话性.重庆大学学报,2002 .25(5);15917 HL Trvedi, A v Vaniker, U Thaker,t al. Human Adipose Tsue -24 宓鸚程,朱顯中,张琪，等圖相合成购腺五肽(TP5).有机化学，Derived Meenelymal Sterm Celle Corbined With Henitpietie Ster2007 ,27(12);1525Cell Tasplention Snptheise Insulin. Trunsplntation Peoceding,15 刘国都.周乐.活性三肽法氏囊素的液相合成西北农业大学，2008 ,40(3);11352008,17(1):4618 Eun Ja Oh, Kiae Pak, JunSub Chai,日al. Syntheia, chancteriar26 陈贯虹,迟建国,邱维忠,等。多肽药物的研究进展，山东科学，tion, and pelininary asesset of anti - Fl pepide - hyluronate2008 ,21(3):42论大黄属和酸模属在化学成分上的内在联系和差异”刘景',夏忠庭” ,周桂荣“,张兰兰(1.中国药科大学,南京11198; 2.天津天士力集团研究院,天津300410)摘要酸模属的多种植物在民间习称“土大黄”,与大黄形态相似,因此常被当作其伪品或混淆晶处理。大黄为临床常用中药,国内外对其研究颇多,关注度较高。而士大黄为民间常用草药，目前对其研究相对较少。虽然在化学成分上两者有一定重叠,但是仍存在许多特异性成分。本文对大黄属和酸模属植物近年的化学成分研究进行综述和比较,以期为酸模属植物进-一步的开发利用提供科学依据。关键词酸模属,大黄属,化学成分中團分类号:R284文献标识码:A文章编号106-687(2011)05. 0058-03大黄和土大黄均为夢科多年生草本植物。大黄属而酸模属植物在我国有26种[),2个变种,目前植物在我国有41种" ,4个变种,其中掌叶大黄唐古未被《中国药典》收载。其主要成分类型包括蒽醌类、特大黄及药用大黄被药典收载使用。大黄的主要中分管 明米盐马势租*黄酮类、色原酮类、二苯乙烯苷、类型包括蒽醌类、蒽酮类、二苯乙烯苷色中国煤化工穿。该属植物在治疗皮肤癣及质、酰基糖苷和苯丁酮苷等。大黄作为传统YHC N M H G确切，但是对其深人的药理研现代药理研究表明其还有解热、止血、抗肿瘤，证明,大 黄和土大黄在治疗病抗衰老和双向调节肌体免疫功能等广泛的药理活证方面虽然多数重叠,但也各有侧重,说明两属植物客生刀。观存在的共性和个性差异14)。本文对大黄属和酸模属●收稿日期2011309