黄芩苷提取工艺研究

007年8月第4卷第23期药物研究黄芩苷提取工艺研究翟保同’,王莹(1河南省南阳市中心医院河南南阳473004;2河南省南阳理工学院河南南阳473004)[摘要]目的:对现有黄芩苷提取工艺中的水提酸沉、水洗醇洗各参数进行优化,为今后黄芩苷的提取和纯化提供参考。方法:以黄芩苷含量为指标通过正交设计实验对影响水提酸沉水洗醇洗工艺的因素进行考察并进行方差分析。结果:确定了提取黄芩苷的最佳工艺条件。结论:该提取工艺合理,黄芩苷收率高质量易于控制。[关键词]黄芩菩;饮片;粗粉;冰乙酸;乙醇;紫外分光光度法;方差分析[中图分类号]R2842[文献标识码]A[文章编号1673-7210(2007)08(b)-091-03Study on the extraction technology of baicalinZHAI Bao-tong, WANG Ying(. Nan Yang Central Hospital, Nanyang 473004, China; 2. Nanyang Institute of Technology, Nanyang 473004, China)[Abstract] Objective: To define the optimal parameters of extracting with water, depositing with acid, washing with waterthanol in the extracting of baicalin from scutellaria. And to supply a reference for the extraction and purification oficalin in future. Methods: Using the content of baicalin as an assessing index, the optimum extracting conditions whichwere about extracting with water, depositing with acid, washing with water and ethanol were selected by orthogonal designand the analysis of variance. Results: The optimum extracting conditions of baicalin were selected. Conclusion: The ex-traction technology is reasonable the yield of baicalin is high, and the quality is easily controlled[Key words] Baicalin; Decoctionpieces: Coarse powder, Glacial acetic acid; Ethanol; Ultraviolet spectrophotometry; analy黄芩中含多种黄酮类化合物,主要为黄芩苷( baicalin)称取黄芩饮片200g,平均分成4份,每份50g;称取黄黄芩苷元(baln)汉黄芩苷( wogonoside).汉黄芩素(wogo苓粗粉200g,平均分成4份,每份50g分别按表1黄芩水nin)、黄芩新素( skulleapflavone)和Ⅱ等,具有抗菌、抗病提取工艺因素水平和表2黄芩水提取工艺正交设计进行试毒、抗变态反应、抗炎、抗氧化,增强机体免疫力,镇静与降验,每份提取液用蒸馏水定容至1000ml容量瓶中,待测含压,利胆与解痉等作用7黄芩的主要化学成分黄芩苷在植物体内以镁盐形式存在,所以可用水作提取溶剂。黄芩苷分子结构中C2上羧基常表1黄芩水提取工艺因素水平表成盐形式存在加酸后黄芩苷分子就游离出来。利用黄芩苷因素药材煮次第1次煎第2、3次煎加水倍在酸性溶液中易析出的性质采用水提取、酸沉淀再用水洗、水平粒度数(次)煮时间(h)煮时间(h)数(倍醇洗的方法进行提取和纯化。1仪器与材料1饮片20201.1仪器紫外分光光度计UV-265(日本岛津)。准确量取每份实验提取液2ml,置烧杯中,加稀盐酸调12材料pHl-2,移人10ml离心管中,每次用水025ml洗涤容器洗黄(中国药品生物制品检定所)黄(购自南阳市涤液并人离心管中,至沉淀全部移人为止。离心,弃去上清药材公司);甲醇为色谱纯;冰醋酸为分析纯。2方法与结果液,每次用丙酮05m洗涤沉淀,离心,弃去丙酮,至丙酮液近无色为止。用95%乙醇将沉淀移至100m容量瓶中加热2.1黄芩水提取工艺的研究利用正交设计,以黄芩苷含量为指标选择药材粒度提使溶解放冷至室温加乙醇稀释至刻度摇匀。然后精密吸取次数、第1次煎煮时间第23次煎煮时间、加水倍数五个取5m,置50m1容量瓶中,加乙醇稀释至刻度,播匀。依照因素每个因素各选二个水平采用L(2)正交表进行设计试分光光度法在279mm波长处测定吸收度按CHO1的吸验(表1)收系数E)673计算黄芩苷的含量结果见表2。中国煤化工CNMHGCHINA MEDICAL HERALD国医药91药物研究·2007年8月第4卷第23期表2黄芩水提取正交试验结果35黄芩苷含量表头设计E23.96512345678巧122221122121123.29522122121479015.775146051545515.98018.01017.16016.220163103.9953.9984.03000540.6390.1690.1190214用正交试验的直观分析法进行分析,从R值的大小可表3黄芩水提取试验方差分析知:各因素的主次顺序为BCE>D>A。较优组合为:方差来源A,BCDE2,即用粗粉、煎煮3次每次煎煮2h每次加12倍1465×103465×103<177121.20量水。C10815908159363对上述资料进行方差分析,见表3。从方差分析知B、Cp0028100281125达到了极显著水平,虽然E没有达到显著水平,但其F值也E0091280091284614较大,应控制在最优水平,而D和A因素可以在任意水平,误差e200571002855127为了节约工时,同时考虑到实际生产中颗粒粉易焦化、粘结,误差e400900m475过滤难的特点。A应取A1,D应取D1。因Ⅱ>l2,Ⅱ心少,Ⅱ。总变异7所以,B取B2,C取C2E取E2。最佳提取工艺是A1B2C2D申P001E,即用黄芩饮片煎煮3次,第1次2h,第23次各1h,每表4黄芩酸沉工艺因素水平次加12倍量水因素相对密度pH值保温温度(℃保温时间(h)静置时间(h)2黄芩酸沉工艺的研究水平ABC用正交试验以黄芩总苷含量(即沉淀量)为指标选择浓1105-101-280缩液相对密度加酸后的pH值、保温温度、保温时间、静置211512034时间5个因素,每个因素各选2个水平,采用L42)正交表进行设计试验(表4)。份按表4酸沉工艺因素水平和表5酸沉工艺正交试验设计称取黄芩饮片800g,第1次煎煮2h第23次各煎煮及黄芩总苷含量进行试验以黄芩总苷含量(即沉淀量)为指1h,每次加12倍量水合并煎液滤过将滤液平均分成8标(表5)表5黄芩工艺正交试验设计及黄芩总苷含量7黄芩苷含量表头设计5121221215.0854.798K,20.21719261829118.38416.520174721844618.13918.35318.3294.5964024.6124.535中国煤化工a20039YHaCN MHG2292山国医药导 CHINA MEDICAL HERALD2007年8月第4卷第23期药物研究·用正交试验的直观分析法进行分析,从R值的大小可裹7黄芩苷的收率及成品率知:因素的主次顺序为 A>BDE。最优组合为 A,BCD,E1。对实验序号粗昔重量(B)粗苷中苷含量()精苷重量(B)上述资料进行方差分析见表6。48.6569468663786521表6黄芩酸沉试验方夔分析799496方差来源A1,708471.708471067810134.12结果表明:1000g黄苓药材中提取精制后精黄芩苷含002633500263351646量为46.8~521g0084666008466652923讨论E178x1078×104<1本实验采用正交设计考察了水提取、酸沉淀、水洗、醇洗误差e2402×103201x10-3误差e348×10316103工艺并进行了方差分析,确定了提取黄芩苷的最佳工艺参总变异2.226133数PQ005:PQ001实验证明该提取工艺合理,黄芩苷收率高,质量易于控制,可以为工业化生产所采用方差分析可见A、B、C、D均达到显著水平,仅E没达到,[参考文献][1江苏新医学院中药大辞典M下册上海:上海人民出版社19772019可以控制在任意水平即最佳组合为 A, DE1o即浓缩至(2]郑虎占薰泽宏余静,中药现代研究与应用(M第4卷北京学苑出相对密度1.05-11080℃测),加稀盐酸调节pH-2,80℃保温版社,19981h静置24h[3]杨克文,张军.黄芩根中抗流感A(H3N2)和B病毒的黄酮类成分23水洗、醇洗工艺的研究574-三羟基8-甲氧基黄酮门国外医学中医中药分册,199183黄芩苷在酸性条件下可析出酸沉后的沉淀物用水洗至4 X, Akatsu H, Dkada. Apoptosis of HIv- infected cells following treatpH50,水洗的目的是洗出酸处理过程中产生的无机盐及nt with sho-gociko-to and its components U]pn J Med Sci Bic些水溶性杂质继用70%乙醇洗至pH70醇洗可以洗去199548(2:7981部分醇溶性的杂质。虽然黄芩苷是黄芩的主要有效成分,但[5] Li BQ, Fu T, Yan YD, et a. Inhibition of HIV-infection by baicalin aflavonoid compound purified from Chinese herbal medicine []. Cell Mol黄芩苷元的作用不可忽视,黄芩苷元的溶解度随着乙醇浓度Biol Reg,1993,39(2:119-123增高逐渐增大,在95%乙醇中的溶解度最大,所以为了减少] Huang HC, Hsieh Ly, Chen HW,etd. Effects of baicalein and esculetin黄芩苷元的损失,用70%乙醇进行醇洗比较合适。on trans-duction signals and growth factors expresion in T-lymphoid24黄芩出膏率及半成品中黄芩苷的含量leukemia cells[ Eur J Pharmacol, 1994, 268(1 ): 73-75取黄芩饮片100g5份,按照以上黄芩苷优选的条件,7贺海平秦菁陈明等.一种新的黄芩类黄酮3567-四羟基-28-二甲氧基黄酮的体外免疫作用门广西医科大学学报2000173353-35进行水提取、酸沉、水洗、醇洗,低温干燥。称量每份粗黄芩苷(收稿日期:2007-04-25)的得率结果见表7。血国該耻刊鬱选,掘厍咖国刊全文数掘库啦亲刊《血国医药导报)志欢迎投稿地址:北京市朝阳区通惠家园惠润园(壹线国际153-601《中国医药导报杂志社邮政编码:10025电话010-59679765967907:801传真.00E3y299163cm中国煤化工CNMHCHINA MEDICAL HERALD医药导提93