DB44/T 570-2008 水体中孔雀石绿残留量的测定——液相色谱荧光法 Determination of malachite green residues in fishery water by high performance liquid chromatography with fluorescence detector

本标准规定水体中孔雀石绿残留量的高效液相色谱检测方法。
本标准适用于水体中孔雀石绿残留量的检测。？[第1页] ICS 6 7.050 B 5024200-2009 DB44 广 东 省 地 方 标 准 DB44/T 570-2008 水体中孔雀石绿残留量的测定 　　— —液相色谱荧光法 Determination of malachite green residues in fishery water by high performance 　　　　　　liquid chromatography with fluorescence detector 2008-12-31发 布 2009-04-01实 施 广东省质量技术」监督局发布 [第2页] DB44/T 570-？ 2008 月 IJ舀 本标准的附录A为资料性附录 。 本标准由广东省海洋与渔业局提出 。 本标准由中国水产科学研究院南海水产研究所质量与标准化技术研究中心归口 。 本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所 。 本标准主要起草人：岑剑伟 、 杨贤庆 、 李来好 、 郝淑贤 、 石红 、 马海霞 、 戚勃 、 孙满义 。 [第3页] DB44/T 570-？ 2008 水体中孔雀石绿残留量的测定液相色谱荧光法 1范围 　　本标准规定水体中孔雀石绿残留量的高效液相色谱检测方法 。 　　本标准适用于水体中孔雀石绿残留量的检测 。 2规范性引用文件 　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有的 修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 　　GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 　　样品中残留的孔雀石绿经过二氯甲烷提取后用硼氢化钾还原为其相应的代谢产物 ， 固相萃取柱净化 后 ， 反相色谱柱分离 ， 荧光检测器检测 ， 外标法定量 。 4试剂 　　除另有规定外 ， 所有试剂均为分析纯 ， 试验用水应符合GB/T 6682一级水的标准 。 4. 1乙腈：色谱纯。 4.2二氯甲烷。 4. 3冰乙酸。 4.4氨水。 4.5孔雀石绿：纯度X98%. 4.6提取液：盐酸羟胺3g ， 对甲苯磺酸0.24g溶于100 mL水中。 4. 7硼氢化钾溶液［0.2 %]：称取0. 2g硼氢化钾溶于100 ML水中 ， 现配现用 。 4.8乙酸铵缓冲溶液［0. 125 mol/L]：称取9.64 g无水乙酸铵溶解于1 000 ML水中 ， 用冰乙酸调pH 至4.5， 过0.45 μ 皿滤膜备用 。 4.9乙酸铵缓冲溶液［0. 1 mol/L]：称仅7. 71 g无水乙酸铵溶解于1 000 ML水3， 用氨水调pH到10.0, 过0.45 μ m 滤膜备用 。 4.10 PRS柱洗脱液：乙酸铵缓冲溶液 （ 4.9)＋乙U=1+1， 现配现用 。 4.11阳离子交换柱：Varian PRS柱或者相当者 ， 500 mg, 3 mL ， 使用前用5 mL乙腈活化 。 4.12标准储备溶液［100 μ g/mL]：准确称取孔雀石绿标准品 ， 用乙腈配制成100 leg/ML的标准贮备液 ， -18℃避光保存． 4.13标准中间液［1 Pg/mL]：吸取孔雀石绿的标准储备溶液 （ 4. 12)1.00 mL至100 mL容量瓶 ， 用乙 腈稀释至刻度 ， 一18℃避光保存 。 4.14标准工作溶液：吸取一定量的孔雀石绿标准中间液 （ 4. 13)， 加入硼氢化钾溶液 （ 4.7) 0.40 mL ， 用 乙Ph稀释至2.00 mL ， 配制成适当浓度梯度的标准工作溶液 ， 现配现用 。 5仪器 5. 1高效液相色谱仪：配荧光检测器 。 [第4页] DB44/T 570一一2008 5.2振摇器或摇床。 5.3旋转蒸发仪。 5.4固相萃取装置。 6色谱条件 6. 1色谱柱：C18柱， 250 mm X 4.6 mm （ 内径） 粒度5 Pm ：或与之相当的色谱柱。 6.2流动相：乙腈十乙酸铵缓冲溶液（ 0. 125 mol/L, pH4.5) =80+20. 6.3色谱柱温：38 C. 6.4流速：1.5 mL/min. 6.5激发波长：265 rim. 6.6发射波长：360 nm. 6. 7进样最：50 YL. 7测定步骤 7. 1提取 　 　先将 水样用0.45 Pm 膜 过滤 ， 除去 固体杂 质 。 准 确移取20 mL水样 于100 mL分 液漏斗 ， 加入2 mL提取 液 （ 4. 6) , 20 mL二氯甲烷 ， 震摇5 min ， 静置 ， 将二氯甲烷层移至100 mL的梨形瓶 。 向分液漏斗加入2 mL提取液 （ 4.6） 和20 mL二氯甲烷重复上述步骤一次 ， 静置分层后 ， 将二氯甲烷层并入同一梨形瓶 ， 于 30℃条件下减压hK发至近干 。 7. 2净化 　 　 将PRS柱 子 接 到 固 相 萃 取 装 置 上 ， 先 用5 mL的 乙 腈 分 两 次 活 化 柱 ， 然 后 用2 mL乙MY]洗 涤 梨 形 瓶 ， 洗 液 加 入1 mL硼 氢 化 钾 （ 4.7)， 轻 轻 振 摇 ， 过 柱 ， 再 加 入2 mL的 乙P"洗 涤 梨 形 瓶 ， 过 柱 ， 将PRS柱 抽 至 近 干 ， 用3 mL PRS柱洗脱液 （ 4.10） 洗脱 ， 接收于5 mL刻度管中定容至3 mL ， 过0.45 pm 滤膜 ， 供液相色谱备 用 。 7. 3色谱分析 　　分别注入50 μ L孔雀石绿的标准工作液及样品提取液于液相色谱仪中 ， 按上述色谱条件进行色谱分 析 ， 记录峰面积 ， 响应值均应在仪器检测的线性范围之内 ， 根据标准品的保留时间定性 ， 外标法定量 。 标准色谱图参见附录A中图A. 1. 7.4空白试验 　　除不加试样外 ， 均按上述测定步骤进行 。 8计算 　　样品中孔雀石绿的残留量按式 （ l） 计算 。 　 　 　 　 　 X ＝＝ AxC, xTX - x 1000 ................................................... (1) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 月 s＞＜ ％ 式 中 ： X -—样 品 中 待 测 组 分 残 留 量 ， 单 位 为 微 克 每 升 （ Pg/L) Cs -—待 测 组 分 标 准 工 作 液 的 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 （ μ g/ML) : 彳 — — 样 品 中 待 测 组 分 的 峰 面 积 ； As-—待 测 组 分 标 准 工 作 液 的 峰 面 积 ； F一 一 样 液 最 终 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL) : vo-—样 品 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL) . 注 ： 计 算 结 果 需 扣 除 空 白 值 。 [第5页] DB44/T 570-2008 9线性范围 　　孔雀石绿标准溶液的线性范围：0.0005 μ g/mL^-0.8 μ g/mL. 10方法检测限 　　本方法的检测限为0.2 ug/L. 11相对标准偏差 　　本标准的相对标准偏差＜15%. 12方法回收率 　　本方法的回收率>, 70 %a [第6页] DB44/T 570一一2008 　　　　附录A 　 　 　 （ 资 料 性 附 录 ） 孔雀石绿标准的液相图谱 w — — 一 — — 一 一 一 一 — — 一 一 — — — — ， 一 — — 一 — — 0 2 4 0 8 1c 图A. 1孔雀石绿标准的液相图谱